【Webinar】单抗配方很难预测，直接测：Stunner 用 2 µL 看粒径、PdI 和 kD / B22

关于本次 Webinar

单抗在合适的缓冲液里保持单分散，降温或提高浓度后状态也稳定。缓冲液不合适，分子间相互作用增多，容易聚集。哪种缓冲液适合哪个单抗，不直接测很难预测。常规做法要分别用 UV-Vis 测浓度、用 DLS（动态光散射）看粒径和聚集。

Stunner 把这两种技术放进同一台仪器。每孔只需 2 µL 样品，不稀释、不加试剂，就能读出浓度、粒径、多分散指数（PdI），以及胶体稳定性参数 B22 和 kD。96 孔整板测浓度约 10 分钟，加上 DLS 约一小时。讲者展示的 IgG 数据中，200–2 mg/mL 范围内准确度在 2% 以内，八次重复的浓度 CV 为 0.2%。样品里有核酸杂质或浊度时，Unmix 能把它们和蛋白信号分开。

案例部分，四个抗体分别换液到四种配方：基础缓冲液都是组氨酸 pH 6 加吐温 80，辅料分别为氯化钠、蔗糖、精氨酸、蔗糖加精氨酸。粒径筛掉了聚集的阿达木单抗加蔗糖组合。含蔗糖样品 PdI 偏高，是 DLS 测到了蔗糖本身的 0.8 nm 峰，并非抗体聚集。再比较 B22 和 kD 的斜率：单抗 1 和曲妥珠单抗偏好只加蔗糖，单抗 2 偏好蔗糖加精氨酸。阿达木单抗在这四种配方里都没有理想结果。最后约 5 分钟是 Q&A，共 6 个问题。问题涉及稀释系列怎么设、Unmix 是否必须开、换液时长与回收率，以及非蛋白样品、其他蛋白和 ADC。

### 你将了解到

• 00:00:00 · 00:00:57 · 开场与讲者介绍 · 产品管理总监 Kevin Lance 主持，介绍主讲人 Stunner 产品经理 Brian Haldeman。
• 00:00:57 · 00:02:17 · 缓冲液选对，单抗才能保持单分散 · 缓冲液合适，单抗在降温或提高给药浓度时仍保持单分散；缓冲液不对，分子间相互作用增多，聚集变多。
• 00:02:17 · 00:04:06 · 2 µL 同时测浓度和粒径 · Stunner 把 UV-Vis 和 DLS 放在同一平台，2 µL 样品不稀释、不加试剂。96 孔整板测浓度约 10 分钟，加上 DLS 约一小时。
• 00:04:06 · 00:07:38 · 浓度测量：动态范围、准确度与 Unmix · IgG 稀释系列从 275 OD 到 0.03 OD；200–2 mg/mL 内准确度在 2% 以内、精密度在 1% 以内。Unmix 把光谱拆成蛋白、核酸等杂质和浊度。
• 00:07:38 · 00:10:42 · 粒径测量与 1% 聚集体的检出 · IgG 八次重复：浓度 CV 0.2%，Z 均直径约 11 nm、CV 约 1.5%。掺入 1% 聚集体的单抗，在强度分布 500 nm 附近出现明显的峰。
• 00:10:42 · 00:13:59 · 实验设计：四个抗体、四种辅料，Unagi 换液 · 四个抗体（含阿达木单抗、曲妥珠单抗）换液到组氨酸 pH 6 加吐温 80 的缓冲液，辅料分别为氯化钠、蔗糖、精氨酸、蔗糖加精氨酸。
• 00:13:59 · 00:15:37 · 换液后查粒径：阿达木单抗加蔗糖聚集 · 其余样品粒径都在 10 nm 左右，只有阿达木单抗加蔗糖偏大；强度分布里多出两个大粒径群体，这个配方被排除。
• 00:15:37 · 00:17:29 · PdI 偏高的来源：蔗糖的 0.8 nm 峰 · 含蔗糖样品的 PdI 普遍高于 0.1，原因是 DLS 测到了 0.8 nm 处的蔗糖峰，抗体本身没有聚集，可以继续表征。
• 00:17:29 · 00:19:20 · B22 和 kD：看斜率的正负 · 沿稀释系列测 KC/R 和扩散系数。斜率为正，说明不易聚集；斜率为负是危险信号。单抗 1 只加蔗糖时斜率为正，加入精氨酸后变平或略负。
• 00:19:20 · 00:21:11 · 汇总：每个单抗偏好的配方不同 · 单抗 1 和曲妥珠单抗偏好只加蔗糖，单抗 2 偏好蔗糖加精氨酸，阿达木单抗在四种配方里都没有理想结果，需要换一批缓冲液再筛。
• 00:21:11 · 00:26:08 · Q&A：浓度范围、Unmix、换液时间、其他蛋白与 ADC · 测胶体稳定性时，IgG 建议从 10 mg/mL 稀释到 1–2 mg/mL，取五六个点。Unmix 可在采集后换应用开关。IgG 换液到 95% 约一小时，回收率常在 90% 以上。Stunner 也有 LNP、病毒载体等应用；筛选流程可用于其他蛋白，也能分开 ADC 的药物和抗体吸收。
• 看懂 Stunner 如何用 2 µL 样品同时给出蛋白浓度、粒径和聚集信息
• 理解 Unmix 如何把核酸杂质和浊度从 280 nm 吸收里分出来
• 学会读强度分布、质量分布和 PdI，分清真聚集和缓冲液成分的信号
• 了解如何用 B22 和 kD 的斜率比较不同辅料，挑出合适的配方