Lunatic · UV/Vis 蛋白与核酸定量

• apps · 三类样品
• how · 工作原理
• unmix · Unmix
• data · 实测数据
• plates · 两种板
• spec · 规格
• next · 下一步
• 申请演示
• 耗材清单
• 样品量 · 2 · µL
• 通量 · 96 · 孔 / 板
• 免稀释范围（High 板） · 0.03–275 · OD
• 全板读数 · 5–10 · min
• 不需要 · 染料、标准曲线；High 板 ≤275 OD 也不用稀释
• 要粒径或聚集？
• IgG 稀释系列的 UV/Vis 光谱，280 nm 峰随浓度升高 · 抗体 / 蛋白 · IgG 到 200 mg/mL，原液直接测
• DNA (Tissue/blood) Unmix 应用：A260 报 89 ng/µL，Unmix 拆出 dsDNA 62 ng/µL、RNA、浑浊、EDTA · DNA · A260 读 89，dsDNA 其实是 62
• 纯 RNA 与 80% RNA / 20% DNA 混合样品的 Unmix 光谱和结果 · RNA · 混进 20% DNA，RNA 照样单独报
• 图 · IgG 在 PBS 中的稀释系列，纵轴换算到 10 mm 光程
• 读图 · 280 nm 峰随浓度升高；最高一条（约 200 mg/mL）峰值约 280 OD，峰形完整
• 常见用途 · 抗体定量、制剂筛选、纯化后 QC、换液后复核
• A260 直读 · 89 · ng/µL
• Unmix dsDNA · 62 · ng/µL
• 拆出 · RNA、浑浊、EDTA 各自的吸收
• 只看 A260 · 高估约四成
• 范围 · 1.5–13,750 ng/µL（2,000 以上用 High 板）
• 常见用途 · NGS 建库 QC、PCR 产物、质粒产量、组织 / 血液 DNA
• 纯 RNA · 514.0 · ng/µL
• 80/20 混合中的 RNA · 388.1 · ng/µL
• 图 · 黑 = 实测光谱，绿 = RNA，青 = 杂质；杂质（A260）0.02 → 2.56
• DNA 混入 · 5–40% 范围内，Unmix 测得 RNA 与目标值 R² = 0.9925
• 传统做法 · 340 或 405 nm 单点扣背景；散射随波长变，浑浊样品扣不干净
• Blank · Unmix 用水做 blank；缓冲液已在模型库里，再扣就重复了
• 拟合质量 · RRSE 超过 2.5% 软件标警告
• 前提 · Strip 的固定光程；标准 96 孔板不能用 Unmix
• 血浆 QC
• 含核酸残留的蛋白 · 1.47 mg/mL · 1.01 mg/mL
• 组织 / 血液 DNA · 89 ng/µL · 62 ng/µL
• RNA（Any source） · 478 ng/µL · 284 ng/µL
• 含核酸残留的蛋白
• 组织 / 血液 DNA
• RNA（Any source）
• 规格 · 准确度 ±2%（认证标准品），精密度 ±1% CV
• 偏差 · 测量均值 ÷ 已知浓度 − 1
• 已知（mg/mL）
• 测量均值
• 201.4 · 201.7 · 0.7% · 0.1%
• 113.1 · 115.0 · 0.6% · 1.7%
• 50.2 · 51.2 · 0.2% · 2.0%
• 19.9 · 20.3 · 0.3% · 2.0%
• 2.35 · 2.37 · 0.2% · 0.9%
• 仪器间变异（162.2 mg/mL IgG） · 2.69% · 20.31%
• 重复 CV（四个蛋白，1–80 mg/mL） · 0.3–2.3% · 4.8–16.1%
• 仪器间变异（162.2 mg/mL IgG）
• 重复 CV（四个蛋白，1–80 mg/mL）
• 怎么选 · 预计 OD ≤40（IgG 约 29 mg/mL）用 Lunatic Plate；更高或未知用 High 板
• 加样后 · 2 h 内上机，测不出蒸发
• 一次性 · 测完即弃，不清洗；用过的孔不能再测
• Lunatic Plate
• High Lunatic Plate
• 微比色皿（光程） · 1 个（0.5 mm） · 2 个（0.1 + 0.7 mm）
• OD 范围（10 mm 换算） · 0.03–40 · 0.03–275
• 双光程取值 · — · >30 OD 取 0.1 mm；<20 OD 取 0.7 mm；之间取平均
• 微比色皿（光程）
• 1 个（0.5 mm）
• 2 个（0.1 + 0.7 mm）
• OD 范围（10 mm 换算）
• 双光程取值
• >30 OD 取 0.1 mm；<20 OD 取 0.7 mm；之间取平均
• Lunatic Plate · ~5 min
• High Lunatic Plate · ~10 min
• 合规 · 21 CFR Part 11：审计追踪、电子签名，需另购 CFR 许可
• 性能验证（PV） · Hellma 认证标准品比色皿板，对应 USP / Ph. Eur.
• 波长范围 · 230–750 nm
• 波长准确度 · ±1 nm（≤400 nm）；±2 nm（>400 nm）
• 光谱分辨率 · 2–2.5 nm（FWHM）
• 检测器 · 512 像素二极管阵列
• 光源 · 氙闪灯，~200 万个样品（~7 年）
• 波长范围
• 波长准确度
• ±1 nm（≤400 nm）；±2 nm（>400 nm）
• 光谱分辨率
• 2–2.5 nm（FWHM）
• 512 像素二极管阵列
• 氙闪灯，~200 万个样品（~7 年）
• 吸光度精密度 · ±0.01 OD（Lunatic Plate，<1 OD）
• 吸光度准确度 · ±0.02 OD（Lunatic Plate，<1 OD）
• 尺寸 · 37 × 46 × 33 cm
• 重量 · 21 kg
• 认证 · CE / FCC / CSA
• 吸光度精密度
• ±0.01 OD（Lunatic Plate，<1 OD）
• 吸光度准确度
• ±0.02 OD（Lunatic Plate，<1 OD）
• 37 × 46 × 33 cm
• CE / FCC / CSA
• Fundamentals 检查 · 建议每 6 个月或搬运后做一次
• 波长 · 每次实验前用氙灯特征峰自动校准
• Lunatic Plate 还是 High Lunatic Plate？ · 选板
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• 2 µL 加样怎么不出错？ · 加样
• GMP 实验室的 IQ/OQ/PV 做什么？ · 合规验证
• UV/Vis 蛋白与核酸定量
• 蛋白和核酸，2 µL 直接定量
• 96 孔微流控板，读整条光谱；High Lunatic Plate 上 IgG 到 200 mg/mL 不用稀释。
• 不需要染料、标准曲线；High 板 ≤275 OD 也不用稀释要粒径或聚集？Lunatic 只做 UV/Vis；DLS 在/product/stunnerStunner
• 蛋白、DNA、RNA，同一块板
• 直接读整条吸收光谱，浓度和纯度一起出。
• 想深入Lunatic 是怎么做到的 →Strip 结构与测量循环 →Unmix 结果怎么读 →
• 2 µL 进板之后，浓度怎么读出来
• 传统做法340 或 405 nm 单点扣背景；散射随波长变，浑浊样品扣不干净BlankUnmix 用水做 blank；缓冲液已在模型库里，再扣就重复了拟合质量RRSE 超过 2.5% 软件标警告前提Strip 的固定光程；标准 96 孔板不能用 Unmix
• Unmix：浓度只算目标组分
• 用参考光谱拟合整条光谱，把核酸、浑浊、缓冲液的吸收拆出去。
• 血浆 QC结果图只显示 350–650 nm，避开 280 nm 蛋白峰，露出血红蛋白（A410）、胆红素（A450）和背景散射。血浆质控 →
• Plasma QC 详细视图：光谱拆成血红蛋白、胆红素、蛋白和浑浊，左下是 RRSE 色块
• 图 1血浆样品：血红蛋白 10.63 mg/dL、胆红素 0.43 mg/dL、蛋白 60.87 mg/mL，残差 1.2%；左下为全板 RRSE 色块
• IgG 2–200 mg/mL，测量值仍成直线
• 规格准确度 ±2%（认证标准品），精密度 ±1% CV偏差测量均值 ÷ 已知浓度 − 1更高IgG（High concentration）应用到 250 mg/mL。浓度上限 →
• Lunatic 测量浓度对已知浓度，y = 1.0073x，R² = 0.9999
• 图 2aIgG 稀释系列 10 个浓度，y = 1.0073x，R² = 0.9999
• 怎么选预计 OD ≤40（IgG 约 29 mg/mL）用 Lunatic Plate；更高或未知用 High 板加样后2 h 内上机，测不出蒸发一次性测完即弃，不清洗；用过的孔不能再测
• 两种板，按 OD 上限选
• 外形相同，同一台仪器通用；差在微比色皿的数量和光程。
• 全板 96 孔读数时间
• 合规21 CFR Part 11：审计追踪、电子签名，需另购 CFR 许可性能验证（PV）Hellma 认证标准品比色皿板，对应 USP / Ph. Eur.自动化SBS 板位；API 或 SiLA；结果可进 LIMS。整合指南 7 篇 →
• Fundamentals 检查建议每 6 个月或搬运后做一次波长每次实验前用氙灯特征峰自动校准
• 软件的 Fundamentals 功能用 5 个色氨酸标准品验证线性，R² = 0.9999
• 图 3Fundamentals：5 个色氨酸标准品（A–E），R² = 0.9999；图中选中的标准品 D 平均回收率 99.12%；全板每孔 Pass
• 按手上的问题读下一篇

氙闪灯光栅230750 nm光谱仪512 像素二极管阵列微比色皿内的样品放大示意光程固定High Lunatic Plate 每孔两个微比色皿 · 放大示意 · 比例非实物2 µL原液直接加，不用染料High 板：IgG 到 200 mg/mL 不用稀释

波长（nm）· 示意透射光强一次闪光，230–750 nm 全谱同时读光强空皿（先读）含样品吸收光谱两次光强之比，换算到 10 mm 光程吸光度

A = −log(I样品 ÷ I空皿)按 OD 选光程两个比色皿各读一条光谱，软件按 OD 取用High Lunatic Plate0.7 mm0.1 mm20–30 取平均Lunatic Plate单个 0.5 mm

OD（10 mm 换算，对数轴）Unmix 拆分用参考光谱拟合整条光谱蛋白核酸浑浊（散射）浓度只按目标组分算一份报告每孔 2 µL · 全板 96 孔- 浓度（目标组分）

• A260/A280 纯度
• 杂质 · 浑浊
• 拟合残差 RRSE（Unmix 应用）

• 加样 2 µL
• 闪光穿过样品
• 算出吸光度
• 双光程接力
• Unmix：拆出各组分
• 0.7 mm · 长光程 · 低浓度
• 0.1 mm · 短光程 · 高浓度
• 83,-2 101,-2 94,86 90,86
• 仪器读数示意