Aunty · 全光谱荧光 + SLS + DLS 稳定性平台

• apps · 三类应用
• how · 工作原理
• screen · 筛选流程
• data · 实测数据
• metrics · 输出指标
• spec · 规格
• next · 下一步
• 申请演示
• 耗材清单
• 样品量 · 8 · µL
• 荧光浓度范围（典型 IgG） · 0.025–300 · mg/mL
• 全板升温 25→95 °C · ~70 · min
• Tm CV（96 孔实测） · 0.8 · %
• 上一代 Uncle · Genentech 筛 16 个配方：DSC 连续 4 天，Uncle 3.5 h，样品少用 18 倍
• 全光谱荧光、导数与 SLS 叠加的升温曲线，标注 Tagg 与 Tm · 抗体 / 配方 · 导数峰定 Tm，SLS 抬头定 Tagg
• AAV9 的 SYBR Gold 荧光与 SLS 随温度变化，标注 Tm 与 Tagg · AAV 衣壳 · AAV9 先放出基因组，再聚集
• 两种单抗在 25 和 42 °C 下扩散系数随浓度变化，拟合出 kD · 胶体稳定性 · kD：分子之间相斥还是相吸
• 图 · 多孔重复叠加，30–90 °C；这组 Tagg 略低于 Tm
• 基因组释放 Tm · 60.6 · °C
• 衣壳 Tagg · 76.3 · °C
• 图 · 蓝线 SYBR Gold 荧光，绿点 SLS；AAV9 5×10¹² vg/mL，PBS
• 检测下限 · 5×10¹¹ vg/mL
• 用时 · Capsid stability 应用 1 h 内；功能性检测要数天
• 图 · mAb1 kD 35.9（25 °C）、17.3（42 °C）；mAb2 −2.3、−0.9（mL/g）
• 加样 · 建议 5 个浓度、三重复；加缓冲液空白得 B22，输入分子量得 G22
• 适用 · kD、B22 ≤20 mg/mL；更高浓度看 G22（正负含义相反）
• 等温两种跑法 · 密封板在仪器里恒温数小时到数天；或在外部培养箱孵育、定期放入读数，软件自动拼接
• 通过标准
• Z-average、PDI、尺寸分布 · PDI <0.2，无大颗粒峰
• Tm、Tagg、Tsize · Tm、Tagg 排名都靠前
• 聚集倾向、聚集动力学 · 储存温度下 SLS、粒径不持续上升
• Z-average、PDI、尺寸分布
• PDI <0.2，无大颗粒峰
• Tm、Tagg、Tsize
• Tm、Tagg 排名都靠前
• 聚集倾向、聚集动力学
• 储存温度下 SLS、粒径不持续上升
• 高低怎么定 · 没有绝对阈值；96 个候选同板同条件测，板内排名即可
• Tagg < Tm · 聚集在去折叠过半之前就开始
• Tagg 高
• Tagg 低
• 推荐：优先进入下一层 · 需关注：调配方提升 Tagg
• 慎选：展开早、聚集晚，先提 Tm · 淘汰或重新设计
• 推荐：优先进入下一层
• 需关注：调配方提升 Tagg
• 慎选：展开早、聚集晚，先提 Tm
• 淘汰或重新设计
• CV 口径 · 整板孔间离散，孔位差异也算在内
• 粒径标准珠 · 三种 PDI ≤0.1，单分散
• NISTmAb · SLS 不升、不聚集；约 80 °C 后直径只增约 5 nm，来自去折叠
• Aunty 测得
• Tm 69.7 / 83.5 °C · DSC 69.2 / 83.1 °C
• 规格 Tm CV ≤2%
• 22 / 102 / 512 nm
• Tm 69.7 / 83.5 °C
• DSC 69.2 / 83.1 °C
• Z-average · 强度加权拟合均值（ISO 22412）；多峰体系要看完整分布
• 组合 · 荧光、SLS、DLS 可同时、单独或组合运行
• 热升温 · Tm · Tonset · Tm：50% 去折叠的温度；Tonset：开始去折叠的温度，越接近 Tm 变性越协同
• BCM · 全光谱按强度加权的重心；红移、蓝移都能追踪
• Tagg · Tsize · Tagg：SLS 持续抬升的起点；Tsize：Z-average 增大到基线 2 倍的温度
• 粒径 · Z-average · PDI · 分布 · I ∝ d⁶，少量大颗粒就拉高 Z-average；PDI <0.2 分布窄
• 胶体 · kD · B22 · 正 = 相斥（稳定），负 = 相吸；≤20 mg/mL
• G22 · 高浓度（>20 mg/mL）更准；正 = 相吸，符号与 B22 相反
• 等温 · k · 等温 SLS / DLS / BCM · 恒温下聚集速率、粒径和构象随时间的变化
• Tm：50% 去折叠的温度；Tonset：开始去折叠的温度，越接近 Tm 变性越协同
• 全光谱按强度加权的重心；红移、蓝移都能追踪
• Tagg · Tsize
• Tagg：SLS 持续抬升的起点；Tsize：Z-average 增大到基线 2 倍的温度
• Z-average · PDI · 分布
• I ∝ d⁶，少量大颗粒就拉高 Z-average；PDI <0.2 分布窄
• 正 = 相斥（稳定），负 = 相吸；≤20 mg/mL
• 高浓度（>20 mg/mL）更准；正 = 相吸，符号与 B22 相反
• k · 等温 SLS / DLS / BCM
• 恒温下聚集速率、粒径和构象随时间的变化
• 密封 · 手工贴膜或用 Aunty 封板机；可连续监测数天
• 荧光激发 · 280 nm、470 nm LED
• 光谱采集 · 250–750 nm 全谱
• 散射光源 · 660 nm 激光（SLS / DLS）
• DLS 粒径范围 · 0.3–1000 nm
• 荧光浓度范围 · 0.025–300 mg/mL（典型 IgG）
• 检测下限 · SLS 50 µg/mL IgG；DLS 0.1 mg/mL lysozyme
• 荧光激发
• 280 nm、470 nm LED
• 光谱采集
• 250–750 nm 全谱
• 散射光源
• 660 nm 激光（SLS / DLS）
• DLS 粒径范围
• 荧光浓度范围
• 0.025–300 mg/mL（典型 IgG）
• 检测下限
• SLS 50 µg/mL IgG；DLS 0.1 mg/mL lysozyme
• 温控范围 · 15–95 °C
• 升温速率 · 0.1–10 °C/min
• 温度准确度 · ±0.1 °C
• Tm 精密度 · CV ≤2%（规格）
• 样品 · 8 µL / 孔，SBS 石英 96 孔板，每分钟读完全板（荧光 + SLS）
• 尺寸 · 43 × 59 × 39 cm
• 重量 · 32 kg
• 温控范围
• 升温速率
• 0.1–10 °C/min
• 温度准确度
• Tm 精密度
• CV ≤2%（规格）
• 8 µL / 孔，SBS 石英 96 孔板，每分钟读完全板（荧光 + SLS）
• 43 × 59 × 39 cm
• 哪种缓冲液和辅料组合最稳定？ · 配方筛选
• kD 和 B22 怎么测、怎么读？（Stunner 数据，原理通用） · B22 与 kD
• AAV 衣壳何时释放基因组、何时聚集？ · Aunty 实测合集
• 内源荧光测不出 Tm，染料怎么加？ · 全光谱荧光
• ADC 比母体 mAb 更不稳定吗？ · ADC 稳定性
• Tm、Tagg 怎么定义？B22、G22 的正负号各指什么？ · 参数释义
• 同行用 Uncle / Aunty 发了哪些文章？ · 发表文献
• 全光谱荧光 + SLS + DLS 稳定性平台
• Tm 和 Tagg，一次升温同时拿到
• 全光谱荧光看构象，SLS / DLS 看聚集和粒径；96 个配方一板。
• 上一代 UncleGenentech 筛 16 个配方：DSC 连续 4 天，Uncle 3.5 h，样品少用 18 倍ADCKadcyla、Enhertu：蔗糖 vs NaCl；Enhertu 在蔗糖中内源荧光定不出 Tm，改用 SYPRO Orange。ADC 稳定性 →
• 单看 Tm 或 Tagg，都可能选错辅料
• 1 mg/mL 牛 IgG 加 500 mM 精氨酸：Tm 降 3.5 °C，Tagg 却从 68.5 升到 73.4 °C。
• 想深入全光谱荧光 →读懂光散射结果 →每个参数的意思 →
• 8 µL 进板之后，发生了什么
• 等温两种跑法密封板在仪器里恒温数小时到数天；或在外部培养箱孵育、定期放入读数，软件自动拼接
• 由浅入深，三层筛选都在一台仪器上
• 每层淘汰一批，下一层只测留下的。
• 升温中 Z-average 粒径随温度变化，以及两条读数的强度分布与自相关函数
• 图 1左：Z-average 在 Tsize 处陡升；右：绿线比蓝线粒径分布更大、自相关衰减更慢
• 两种配方在恒温下荧光与 SLS 随时间变化
• 图 2恒温约 14 h：配方 1 的 SLS（三角）一直贴近基线，配方 2 约 5 h 后明显上升
• 高低怎么定没有绝对阈值；96 个候选同板同条件测，板内排名即可Tagg < Tm聚集在去折叠过半之前就开始
• 拿到 Tm 和 Tagg，按四格判断
• CV 口径整板孔间离散，孔位差异也算在内粒径标准珠三种 PDI ≤0.1，单分散NISTmAbSLS 不升、不聚集；约 80 °C 后直径只增约 5 nm，来自去折叠
• NISTmAb 的 Tm 与已发表 DSC 值相差 ≤0.5 °C
• Z-average强度加权拟合均值（ISO 22412）；多峰体系要看完整分布组合荧光、SLS、DLS 可同时、单独或组合运行
• 每个指标怎么读
• 密封手工贴膜或用 Aunty 封板机；可连续监测数天自动化SBS 板型可上液体工作站；SiLA 2 API 载入方法、启动、查询状态，对接在集成中。接入指南 →安装两侧各留 60 cm 维护空间。安装前准备 →
• 8 通道移液器向 Aunty 石英 96 孔板加样
• 图 38 通道移液器向 Aunty 石英 96 孔板加样
• 按手上的问题读下一篇

Aunty 石英板 · 96 孔 · 加样后封膜280 nm

光谱仪250–750 nmLED660 nm散射光检测115°板温25.0 °C石英板孔内的样品 · 放大示意比例非实物 · 光路为示意8 µL每孔 8 µL，每板 96 个样品荧光可测 0.025–300 mg/mL（典型 IgG）封膜防蒸发，可连续测数天

nm峰约 330 nm280 nm LED 激发色氨酸光谱仪每次采 250–750 nm 全谱展开时峰会红移到约 350 nm染料模式：470 nm LED（如 SYPRO Orange）BCMTm导数峰温度（°C，示意）SLS 散射强度与荧光同一次升温并行采集示意为先展开后聚集；也有样品 Tagg 低于 Tm（如牛 IgG）荧光 BCMTagg温度（°C，示意）SLS 强度 ∝ 分子量 × 浓度DLS 散射光涨落聚集体越大，涨落越慢时间 →Z-averageTsize

dH = kBT ÷ (3πηDt)一次升温，一份报告同一孔 · 同一份 8 µL

• 加样 8 µL、封膜
• 280 nm 激发荧光
• 升温：分子展开
• SLS：聚集 → Tagg
• DLS：粒径变大
• M-11,-2 q3,-7 7,-2 t7,1 t6,-3
• M-10,3 q2,-8 6,-4 t6,4 t8,-6
• M-9,-5 q5,2 4,7 t8,0 t6,-6
• Tm · Tonset · 荧光 BCM
• Tsize · Z-average · PDI · DLS
• 96 孔同时升温 · 荧光、SLS 每分钟一遍
• Tsize · Z-average · PDI
• 96 孔同时升温
• 荧光、SLS 每分钟一遍
• 83,-2 101,-2 94,86 90,86
• 仪器读数示意