【Webinar】ADC 的 DAR 怎么测：重叠光谱也拆得开

关于本次 Webinar

UV-Vis 测 ADC 通常很快，但真样品常卡在两个地方：抗体和 payload 的吸收光谱高度重叠，或者手头没有 payload 的消光系数。用了几十年的传统两波长法要 4 个消光系数，抗体和 drug linker 在两个波长下各要一个；光谱一重叠，或者缺一个消光系数，这套计算就走不下去。

这次 Kevin Lance 讲的是 Stunner 的一组新应用，核心是 ADC Decode：不需要 drug linker 的先验信息，也能把高度重叠的 ADC UV-Vis 光谱拆开，分别算出抗体和 payload 的贡献。2 µL 样品就同时给出抗体浓度、药物浓度和 DAR，整板约 10 分钟。再加上内置 DLS，粒径和聚集信息在同一次测量里一并拿到，每个样品约 45 秒到 1 分钟。

演讲里 Kevin 用 trastuzumab 配三种 payload（emtansine、deruxtecan、vedotin）做案例，展示 ADC Decode 怎么把重叠光谱拆成抗体谱和药物谱。拆出的结果再拿谱一致性、文献值、线性/精密度、以及 HIC/LC-MS 的 CoA 做交叉验证（准确度约 10% 以内）。没有消光系数时，Stunner 改报 DAAR（药物抗体吸光度比）作为 DAR 的代用量。最后的 14 个问答里，对已有仪器的用户，2024 年 1 月以后生产的 Stunner 都能升级使用 ADC Decode。其余问题覆盖浓度下限、死体积、抗体-oligo 偶联、浊度和聚集怎么处理等。

### 你将了解到

• 00:00:00 · 00:01:26 · 开场：主持人与主讲人介绍 · Ross（资深应用科学家）主持，介绍主讲 Kevin Lance 和今天的主题：Stunner 怎么解开高度重叠的 ADC UV-Vis 光谱、测出 DAR。
• 00:01:26 · 00:03:34 · ADC 的 UV-Vis 定量和 DAR 为什么难 · 抗体的浓度（UV-Vis）和粒径/聚集（DLS）本来好测；换成 ADC，DLS 照旧，但 UV-Vis 要拆出抗体和药物、算平均 DAR 就变难，尤其面对不熟悉的新分子。
• 00:03:34 · 00:06:06 · Stunner 怎么测：2 µL 微流控 + 双光程 + UV-Vis/DLS · 96 孔换成微流控回路，2 µL 免前处理进样；双光程微比色皿给出宽动态范围，UV-Vis 整板约 10 分钟、加 DLS 约 1 小时；样品互不污染，可稳 2 小时。
• 00:06:06 · 00:07:45 · 老派双波长 DAR 法，以及它卡在哪 · 传统两波长法要 4 个消光系数（抗体、drug linker 各两个波长）；一旦光谱重叠、或拿不到消光系数，这套数学就走不下去。
• 00:07:45 · 00:12:03 · ADC Decode：不用先验，把重叠光谱拆成抗体谱 + 药物谱 · Stunner 存了抗体谱，用 280–300 nm 的色氨酸特征找到最优拟合、反推出药物谱；拿 trastuzumab 配 emtansine/deruxtecan/vedotin 三种 payload 演示，总谱拆成蓝色抗体 + 绿色药物。
• 00:12:03 · 00:16:00 · 验证：谱一致、对文献、线性/精密度/准确度 · 同一 drug linker 不同抗体拆出的药物谱高度吻合、也对得上文献；1:2 稀释系列里 ADC Decode 和 dual wavelength 结果一致，DAR 稀释不变；对 HIC/LC-MS 的 CoA，准确度在约 10% 以内。
• 00:16:00 · 00:18:16 · 没有消光系数就报 DAAR；怎么反推消光系数 · 缺消光系数时改报 DAAR（药物抗体吸光度比），OD 与浓度线性相关，可跨条件横比；有一个已知 DAR 的 ADC 时，又能反推出摩尔消光系数，用到同 payload 的其他 ADC 上。
• 00:18:16 · 00:20:23 · 拓展到抗体-oligo 偶联 + DLS 同步看粒径聚集 · 同样方法能测抗体-oligo 偶联物的抗体-oligo 比；DLS 在同一次读数里给粒径，三个 ADC 里 trastuzumab deruxtecan 分布偏宽，提示可能要优化缓冲液抑制聚集。
• 00:20:23 · 00:20:57 · 小结，转入问答 · Ross 回顾：一台仪器、2 µL，拿到抗体浓度、药物浓度、DAR，外加 DLS 的粒径和聚集；接下来进入观众问答。
• 00:20:57 · 00:28:53 · 问答：浓度范围、死体积、老机型升级、浊度等 · 14 个问题覆盖：UV-Vis 整板约 10 分钟、加 DLS 每样约 45 秒到 1 分钟；推荐 ≥1 OD@A280（约 1 mg/mL），可压到 0.5 OD；只用 2 µL、没有额外死体积；抗体-oligo 更好测；2024 年 1 月以后生产的 Stunner 都能升级用 ADC Decode；浊度可从光谱里扣掉；无消光系数用 OD 横比；decode 靠色氨酸特征。
• 重新认识 UV-Vis 怎么测抗体浓度、药物浓度和 DAR，哪怕光谱重叠、消光系数未知
• 跟着走一遍 Stunner 最新的几个 ADC 应用，看它们怎么把 UV-Vis 方法简化下来
• 理解在 ADC 开发各阶段用 2 µL 同步测 UV-Vis 和 DLS，能省掉哪些步骤