Stunner 在 Lunatic 的 UV/Vis 光谱基础上,加了动态光散射(DLS)测粒径和聚集,Stunner AF 还多了荧光通道测包封率。三套光学系统集成在一台仪器里,2 µL 样品就能同时测出浓度、粒径和多分散性。
### UV/Vis 吸收光谱
和 Lunatic 完全一样的氙闪灯 + 512 像素阵列检测器,230–750 nm 全波段扫描。测浓度(蛋白 A280、核酸 A260)、纯度比值(A260/A280、A260/A230)、Unmix 光谱反卷积。
### 动态光散射(DLS / RADLS)
两个 660 nm 激光二极管照射样品,雪崩光电二极管(APD)检测散射光的强度波动。通过自相关分析计算出分子/颗粒的流体动力学直径(0.3–1000 nm)和多分散指数(PdI)。RADLS 模式默认在 7 个角度上采集数据。不同大小的颗粒在各角度的散射强度不同,多角度采集能把它们各自的贡献分开,粒径分布因此比单角度 DLS 还原得更准。
### 可见光荧光(仅 Stunner AF)
蓝色 LED(475 nm 激发,515–565 nm 发射)和红色 LED(624 nm 激发,672–712 nm 发射)双通道。主要用途:用 RiboGreen 染料测 LNP 的游离核酸,结合 UV/Vis 测的总核酸浓度算出包封率(EE%)。
软件主界面按样品类型分成 6 个入口,比 Lunatic 多了 Viral Vectors 和 Nanoparticles:
Stunner 和 Lunatic 共用同一套软件:Lunatic & Stunner Client 和 Lunatic & Stunner Analysis。UV/Vis 部分的所有操作(选应用、板布局、blanking 策略、Unmix、结果查看、报告导出)完全一样。已经会用 Lunatic 的用户,上手 Stunner 只需要再了解 DLS 设置(AF 另有荧光通道)和 Stunner Plate。
两台仪器的差异集中在硬件和应用范围:
Lunatic:Stunner / Stunner AF
UV/Vis / ✓ / ✓(相同光学系统)
DLS / RADLS:✓ —;✓(相同光学系统) ✓(660 nm 激光 + APD)
荧光:✓ —;✓(相同光学系统) AF 型号有(蓝/红双通道)
板类型:✓ Lunatic Plate / High Lunatic Plate / 板架 + 条带;✓(相同光学系统) Stunner Plate(样品板仅此一种,双光程)
标准曲线:✓ ✓;✓(相同光学系统) —(不支持)
功耗 / 重量:✓ 30W / 21 kg;✓(相同光学系统) 额定 40W / 30–30.4 kg
UV/Vis 相关的操作指南(建实验流程、Classic 结果解读、Unmix 结果解读)同样适用于 Stunner,这个系列不再重复。
Stunner 正面。进样托盘(Microwell plate drawer)和多色指示灯。
测量完成后托盘自动弹出,30 秒内不取板会自动收回(可以在软件里点 Open tray 重新打开)。
指示灯颜色因型号不同:
灯光状态 / Stunner / Stunner AF
就绪:Stunner 白色常亮;Stunner AF 绿色常亮
正在启动:Stunner 白色闪烁;Stunner AF 白色闪烁
托盘移动 / 测量中:Stunner 蓝色闪烁;Stunner AF 绿色闪烁
报错:Stunner 红色常亮;Stunner AF 黄/红色闪烁
托盘卡住:Stunner 红色闪烁;Stunner AF 红色闪烁
开机自检:Stunner 黄色闪烁;Stunner AF 黄色闪烁
Stunner 背面。编号 1–8 为功能接口和标签。注意左侧的 Class I 激光安全标签。
# / 名称 / 说明
1:名称 激光安全标签;说明 Class I 激光产品,正常使用无辐射风险
2:名称 电源开关;说明 "0" = OFF,"I" = ON
3:名称 24V DC 电源插口;说明 60W,外置 AC/DC 适配器(100–240V AC)
4:名称 以太网接口;说明 RJ-45,TCP/IP 局域网
5:名称 USB-A 端口;说明 连接控制电脑
6:名称 USB-B 服务端口;说明 21CFRp11 加密狗或售后服务
7:名称 铭牌;说明 型号、序列号、额定功耗 24V DC / 40W(外置适配器最大输出 60W)
8:名称 FCC 合规标签;说明 射频合规声明
注意:非自动化用途的加密狗要插在控制电脑上,插在仪器背面软件识别不到。以太网线如果较长,需要加磁环(snap ferrite clamp,型号 Wurth Elektronik 742 711 32)。
测量时间取决于选了哪些光学模块。UV/Vis 最快,加了 DLS 就要多花时间等散射信号采集,角度越多、每角采集次数越多,时间越长。下表按仪器用户指南里的 Stunner Plate 规格表列出:
测量模式:96 孔耗时
UV/Vis only:~10 分钟
UV/Vis + 荧光:~15 分钟
UV/Vis + DLS(1 角度):~1 小时
UV/Vis + RADLS(7 角度):~2 小时
UV/Vis + DLS / RADLS + 荧光:荧光对总时长影响很小,参考上面两行
大多数实验用默认 DLS 设置就够了。浓度很低或分子很小的样品,可以在 Experiment Info 界面切到 Detailed 或 Custom 模式,增加角度、采集次数和采集时间,代价是测量时间相应延长。
### 下一步
→ Stunner Plate 和加样操作
→ DLS 是怎么测的