Lunatic 微流控板怎么选:按 OD 上限和读板时间

Lunatic 微流控板怎么选

Lunatic Plate 的 OD 上限 40,96 个样品约 5 分钟读完;High Lunatic Plate 把上限推到 275,读板时间约 10 分钟。两者的精度都来自微流控条带的固定光程,差别在微比色皿的数量和光程。条带可以装进板架使用,也可以买预装整板,两种形式对应不同的工作流。

条带的微流控结构

Lunatic 的条带(Lunatic Plate Strip)由 COC(环烯烃共聚物)注塑成型,紫外到可见光波段透过率高。每条 Strip 上排列 16 个加样孔,间距 9 mm,符合 SBS 标准。可以直接用多通道移液器或液体处理机器人加样。

加样孔是锥形的,样品滴入后通过毛细力被立刻吸进下游的储液腔(capillary storage chamber),最多容纳 2 µL。样品离开敞口的加样孔进入密闭腔体,所以加样后可以放置 2 h 再测(见下表)。

储液腔继续往下连接微比色皿,这是真正发生光学测量的位置。比色皿的光程在制造时就固定好了,不受加样体积波动的影响。比色皿末端是排气孔,和仪器内部的真空系统相连。

上:Strip 内部结构,加样孔(Input well)、储液腔(Storage reservoir)、微比色皿(Micro-cuvette)。下:四步测量循环示意。

测量循环:先读空腔,再读样品

仪器对每个孔位执行的测量分四步:

先测空腔,是因为每个微比色皿在注塑成型时都有微小差异。空腔读数记下了这个比色皿本身对光的影响;灌入样品后再测一次,两次读数相减,剩下的就是纯粹来自样品的吸光度。这也解释了为什么已经用过的孔位不能再测:比色皿里已经有液体,仪器没办法拿到空腔参考值。同一个样品在同一孔位重测也是如此。

Lunatic Plate vs High Lunatic Plate

两种板的条带外形完全一样,区别在微比色皿。Lunatic Plate 每个孔位有 1 个比色皿(光程 0.5 mm),OD 上限 40,96 个样品约 5 分钟读完。High Lunatic Plate 有 2 个比色皿(0.1 mm + 0.7 mm),仪器依次灌注和读取两个比色皿。双光程组合把 OD 上限推到 275,代价是测量时间翻倍,约 10 分钟。

参数 / Lunatic Plate / High Lunatic Plate

精密度和准确度取自 Lunatic User Guide(2023 年 10 月版)技术参数表。Tech Note《A look under the hood of Lunatic》表 3 另按 <2 OD、>2 OD、>200 OD 分档,数值略有不同。

选板依据

提取后的核酸、稀释到位的蛋白,这类浓度范围可控的样品用 Lunatic Plate,5 分钟出数据。高浓度制剂(比如 100+ mg/mL 的单抗)、浓度范围未知的样品用 High Lunatic Plate。高量程省掉了稀释步骤,也就省掉了稀释引入的误差。

板架与整板:两种使用方式

Lunatic Plate Frame(板架)

铝合金材质,黑色。深色背景下,已灌液的加样孔和空孔容易分辨。板架外形符合 SBS 标准 96 孔板尺寸,最多放 6 条 Strip。条带底部有定位销,表面印有三角方向标记,只能以正确朝向插入板架。不需要每次用满 6 条,按实际样品数灵活搭配。

预装整板

预装整板是出厂时已把 6 条 Strip 装进塑料框架的整板,拿到就能用;Lunatic Plate 和 High Lunatic Plate 都有这种形式。整板带条形码标签,用于 LIMS 追踪。可堆叠存放,对自动化工作流更友好。没有用完的孔位可以留到后续实验使用。比如跑了 32 个样品,剩下的 64 个孔位下次继续用。

左:Lunatic Plate Frame(铝合金板架,可装 1–6 条 Strip)。右:预装整板(6 条 Strip 预装,自带条形码)。

用标准 96 孔板测量

Lunatic 也兼容标准 96 孔板(透明平底),已经加好样的板可以直接放进去扫。不过有几个限制:

保质期与一次性使用

Lunatic 条带和整板的保质期是 18 个月,以包装上印的到期月份为准。过期后 COC 材料的表面性质可能改变,毛细自灌注不一定能正常工作。样品充不满储液腔的话,测量数据就不可靠了。

已经用过的孔位不能重复使用,三个原因:

可以部分使用:一块板上没有用完的孔位可以保留到下次实验使用,只要条带还在保质期内。不必每次都用满 96 个孔。