Lunatic 浓度上限:250 mg/mL IgG 直接测

Lunatic 浓度上限:250 mg/mL IgG 直接测

Lunatic 的动态范围是 0.03–275 OD,配合 IgG (High concentration) 应用可以直接测量 250 mg/mL 的全长 IgG。在 9 台仪器上的 1–200 mg/mL IgG 验证中,平均 %CV 不超过 2.7%,% bias 在 −1.7% 到 3.5% 之间。

制剂浓度升高,测量上限要跟上

生物制药行业有个明确的趋势:为了用更小的注射体积维持治疗效果,蛋白制剂的浓度越来越高。这对定量仪器提出了两个要求:测量上限要够高,而且不能靠稀释来凑。

Lunatic 的 Regular strip 和 High strip 量程不同:前者 OD 上限是 40,后者扩展到 275。按 IgG 的 E1% 13.7 折算,275 OD 约对应 200 mg/mL;浓度再高,就要选 IgG (High concentration) 应用。按应用说明,IgG (High concentration) 应用可以测量高达 250 mg/mL 的全长 IgG 分子。下文的验证做到 200 mg/mL。

Lunatic(A)板式读取器,5 分钟 96 个样品,支持手动或机器人上样。Little Lunatic(B,已停产)芯片格式,用 Lunatic Chip 时约 2 分钟 16 个样品。

双光程微比色皿:不稀释就能测高浓度

能测到 275 OD,关键在耗材的微流控设计。每条 strip 上有加样孔、储液腔和微比色皿。微比色皿是注塑成型的,光程固定、批间一致,不依赖机械运动部件。

Regular Strip / Chip

1 个微比色皿,0.5 mm 光程

0.03–40 OD

High Strip / Chip

2 个微比色皿,0.1 + 0.7 mm 光程

0.03–275 OD

高浓度蛋白溶液粘度大,但 Lunatic 的微流控通道能处理最高 40 cP 的样品。样品加入加样孔后被毛细作用吸入储液腔,再由 Lunatic 泵送入微比色皿,整个过程只需要 2 µL。

Lunatic 微流控耗材:Lunatic Chip(左)和 Lunatic Plate(右)。High 版本包含两个相邻的微比色皿(0.1 + 0.7 mm 光程),动态范围达 0.03–275 OD(10 mm 等效)。

9 台仪器验证:1–200 mg/mL,平均 CV 不超过 2.7%

实验设计

IgG 梯度稀释系列(重量法),1–200 mg/mL,共 13 个浓度点。

仪器:7 台 Little Lunatic + 2 台 Lunatic(合计 9 台)。

Lunatic 每组 8 次重复(octuplicate);Little Lunatic 的重复次数未单独注明。

(A)单台 Lunatic 上 8 次重复的 UV/Vis 光谱叠加。(B)9 台仪器的平均 A280 OD 值 vs. 目标浓度,绿色线为整体平均值。插入表格为各浓度点的平均 %CV。

mAb (mg/mL):平均 %CV

全部 13 个浓度点的平均 %CV 在 0.5%–2.7% 之间。分开看 9 台仪器,单台的 %CV 在 0.1% 到 3.5% 之间,跨仪器的一致性同样可靠。

准确度方面,用传统 10 mm 比色皿读数作为参考,全部仪器的平均 % bias 在 −1.7% 到 3.5% 之间。

以约 200 mg/mL 为界选应用

约 200 mg/mL 以内的 IgG,用 High 板直接测,不用稀释,上面 9 台仪器的数据覆盖的就是这个浓度区间。浓度更高、需要测到 250 mg/mL 的全长 IgG 时,选 IgG (High concentration) 应用。用 High 板约 10 分钟读完 96 个样品。