162 mg/mL 单抗：Lunatic 系列仪器间 CV 2.69%

162 mg/mL 单抗：Lunatic 系列仪器间 CV 2.69%

高浓度生物制剂定量有三个常见的难点：光程缩放精度、浊度校正方式、弱信号检测能力。用 0.02–160 mg/mL IgG 梯度在 4 台 Lunatic 系列仪器（2 台 Lunatic + 2 台已停产的 Little Lunatic）和 4 台 NanoDrop 上对比。两者的差别集中在高浓度端的仪器间一致性：162 mg/mL 时，仪器间 CV 分别是 2.69% 和 20.31%。

• 2.69% — Lunatic CV @ 162 mg/mL
• 20.31% — NanoDrop CV @ 162 mg/mL
• ≤7% — Lunatic % bias 全范围
• −20~34% — NanoDrop % bias 范围

高浓度蛋白定量，难点在哪

UV/Vis 测浓度的速度很快，但对高浓度样品，准确度和精密度经常出问题。问题集中在三个地方：

光程缩放

高浓度样品的吸光度太高，需要把光程从标准 10 mm 缩短。缩短后的光程是否精确、是否可复现，直接决定了结果的可信度。

背景校正

高浓度蛋白容易聚集，产生明显的浊度。传统仪器在 340 nm 或 405 nm 做单点背景扣除，假设散射在所有波长上一样大。但实际上散射随波长变化（瑞利散射），单点扣除会引入系统误差。

弱信号检测

浓度越高，样品吸收的光越多，留给检测器的残余光越少。光学系统和信号处理算法必须能在极低信号下仍然给出准确读数。

Lunatic 的做法

Lunatic 的动态范围覆盖 0.03–275 OD。两种耗材分别对应不同浓度区间：Regular strip（0.5 mm 光程，最高 40 OD）和 High strip（0.1 + 0.7 mm 双光程，最高 275 OD）。光程是注塑成型的固定值，不依赖机械运动部件。高浓度样品在 0.1 mm 光程上读数，吸光度按光程比例降低，检测器收到的残余光就不至于弱到读不准。下文对比中，4 台 Lunatic 系列仪器在各浓度点的仪器间 CV 都不超过 3.7%。

浊度校正方面，Lunatic 在整个 UV/Vis 光谱上拟合一条波长依赖的散射曲线（瑞利散射模型），逐波长做背景校正。对纯样品，这种校正和单点扣除结果差不多。对有浊度的高浓度样品，两者差别明显：瑞利散射校正能更准确地把浊度贡献从蛋白吸收中剥离出来。

Lunatic（A）板式读取器，5 分钟 96 个样品，支持手动或机器人上样。Little Lunatic（B，已停产）芯片格式，用 Lunatic Chip 时约 2 分钟 16 个样品。

Lunatic 的浊度校正：在整个 UV/Vis 光谱上拟合波长依赖的散射曲线（灰色线），而不是在 340 nm 一个点上做背景扣除。软件界面同时显示 A280 浓度、E1%、Background、A280 值和 A260/A280 比值。

Lunatic vs. NanoDrop：跨仪器一致性对比

实验设计

单抗以重量法配制 IgG 梯度稀释系列（标称 0.02–160 mg/mL，下表最高浓度点为 162.2 mg/mL），溶剂为 5 mM NaSuccinate + 60 mM Trehalose，pH 5.0。

仪器：2 台 Lunatic + 2 台 Little Lunatic（合计 4 台），3 台 NanoDrop 2000 + 1 台 NanoDrop One（合计 4 台）。

所有仪器先用重铬酸钾（K₂Cr₂O₇）水溶液做校验：350 nm 处 OD = 0.657 ± 0.011，全部通过。

Lunatic 每组 8 次重复，Little Lunatic 每组 5 次重复。

4 台 NanoDrop（A）和 4 台 Lunatic 系列仪器（B）对 IgG 梯度稀释系列的测量结果。每个点为单次测量值。

单台仪器内部的重复性，NanoDrop 和 Lunatic 其实差不多。0.1 mg/mL 样品上，NanoDrop 的 SD 在 0.003–0.011 mg/mL，Lunatic 在 0.005–0.009 mg/mL。

差距出在仪器之间。下表是各浓度点的仪器间 CV：

IgG (mg/mL) / Lunatic CV / NanoDrop CV

（A）各仪器的平均浓度叠加图，NanoDrop（灰色）和 Lunatic（绿色），蓝色线为目标浓度。（B）各浓度点的仪器间 %CV。

% bias（偏差百分比）

Lunatic

−2.4% 到 7%，全浓度范围内紧贴目标值

NanoDrop

−20.4% 到 33.5%，高浓度端偏差急剧放大

162 mg/mL 的样品，在多台 Lunatic 上的仪器间 CV 是 2.69%；同一个样品在多台 NanoDrop 上是 20.31%。NanoDrop 单台重复性不差，但换一台机器结果可能就变了。实验室有多台仪器、或需要和合作方比对数据时，这种仪器间差异会让结果无法直接比较。

单台重复性相当，仪器间 CV 和偏差差别大

NanoDrop 在单台仪器上的重复性和 Lunatic 相当，仪器间变异则明显更大，特别是在高浓度端（100+ mg/mL）CV 在 20% 上下，偏差最高到 33.5%。

Lunatic 在表中 0.1–162.2 mg/mL 各浓度点的仪器间 CV 都不超过 3.7%，偏差不超过 7%。所以在这一浓度范围内，同一个样品在本实验的 4 台 Lunatic 系列仪器上给出的结果可以直接比较，不必按仪器分别换算。

• pitfalls · 高浓度定量的三个难点
• how-lunatic · Lunatic 怎么解决
• vs-nanodrop · 对比 NanoDrop
• ≤7% · Lunatic % bias 全范围
• −20~34% · NanoDrop % bias 范围