【Webinar】几微升 EV 样品，一次测浓度、粒径和亚群

关于本次 Webinar

新的泛四跨膜蛋白 Luni 上，9 个捕获点都包被 CD9、CD63、CD81 三抗体混合物。它先捕获四跨膜蛋白阳性的外泌体、定量 EV 总量，再统计其中各亚群的计数和频率。这样设计，是因为细胞外囊泡（EV）表征本来就是在复杂背景里找少数目标。即便是纯化过的细胞培养上清，脂蛋白、细胞碎片、蛋白聚集体也常混在里面，干扰粒径、浓度和目标颗粒频率的判断。换成复杂体液、样品量有限，或是要找稀有亚群，难度还会更高。

Leprechaun 用单颗粒干涉成像测粒径，用免疫荧光测表面标记，在同一次测量里给出粒径、总浓度和亚群频率。每个 Luni 最多加 25 µL 样品，粗样品不必先浓缩或纯化；搭配现成或自选的荧光标记抗体，就能分析目标表型。表面分析做到单颗粒级别，粒径检测下限 35 nm，所以稀有 EV 能和形似颗粒分开计数，所有颗粒的完整粒径分布也同时给出。

### 你将了解到

• 00:00:00 · 00:01:22 · 开场与讲者介绍 · 主持人 Roisin McGuigan 介绍演讲者 Kevin Lance（Unchained Labs 产品管理总监）。
• 00:01:22 · 00:02:41 · EV 分析的四个难题 · 样品复杂、颗粒小于 200 nm、高度多分散、稀有亚群难找，每一项都限制了传统方法。
• 00:02:41 · 00:03:23 · 现有单颗粒技术的能力盲区 · NTA 的表型分析可能受光漂白限制，TRPS 完全不能做表型分析，而且两者都要求样品先纯化。
• 00:03:23 · 00:05:30 · Leprechaun 怎么做：35 nm + 4 标记 + 几微升粗样 · 干涉成像测尺寸、免疫荧光看表型，单次测量给出浓度、粒径和最多 4 个标记物，样品无需预纯化。
• 00:05:30 · 00:07:30 · 新耗材泛四跨膜蛋白 Luni：CD9/63/81 三抗体混合捕获 · 9 个捕获点都包被 CD9+CD63+CD81 三抗体混合物，即使是很粗的样品也能特异捕获外泌体。
• 00:07:30 · 00:09:25 · 三种分析配置：纯干涉 / 加 pan 荧光 / 加自定义抗体 · 依次是最快的总颗粒计数、三色荧光分群，以及加入自有抗体的定制分析。
• 00:09:25 · 00:12:00 · 线性范围与 Vesiculab GFP 掺入实验 · 动态范围孵育 1 小时为 5×10⁶–5×10⁸ /mL，孵育 16 小时为 5×10⁵–5×10⁷ /mL；HEK293 EV 中掺入 GFP 阳性 EV，验证亚群定量能力。
• 00:12:00 · 00:14:55 · 其他 Luni 类型、cargo 检测、Flex kit 与自动化 · 经典三抗体 Luni、血浆 Luni、鼠源 Luni；syntenin 等内部 cargo 检测；Flex 自定义捕获；Luni Washer 一次跑 24 个样。
• 00:14:55 · 00:21:18 · Q&A：纯度影响、灵敏度极限、ExoView 对比、自动化、非 EV 应用 · 粗 vs 纯样品 CV、单分子荧光灵敏度、cell culture 上样准备、Leprechaun 与 ExoView 的区别、Luni Washer 自动化程度、慢病毒和其他病毒分析。
• 理解样品少、亚群稀有、颗粒小如何限制现有方法
• 了解新的泛四跨膜蛋白 Luni 怎么用 CD9/63/81 三抗体混合物捕获外泌体、定量 EV 总量
• 掌握三种分析配置的差异和适用场景：纯干涉、加 pan 荧光、加自定义抗体
• 了解从粗细胞培养液、血浆、血清到 CSF、尿液的样品兼容性边界