【Webinar】EV 不用先纯化，粗样品直接测粒径、浓度和表型

关于本次 Webinar

粗样品不经纯化直接上机，Leprechaun 一次测量就给出细胞外囊泡（EV）的粒径、浓度和最多四个标志物的表型。难点在于，脂蛋白、细胞碎片、蛋白聚集体的粒径和 EV 重合，纯化过的细胞培养上清里也很难分辨出真正的 EV。样品换成复杂体液、量很有限，或者要找的是稀有亚群，难度还会更高。

Leprechaun 把捕获、测粒径和测表型放进一步：用 Luni 耗材直接免疫捕获囊泡，同一次测量给出粒径、浓度，还有最多四个表面或 cargo 标志物的表型。四个标志物来自三个荧光通道和一个捕获抗体。每个样品最多用 25 µL，稀释后加到 Luni 上的总体积为 50 µL；从细胞培养液到粗血浆都可以直接上机。灵敏度下探到 5×10⁵ particles/mL（孵育 16 小时），粒径最小测到 35 nm。因为逐个颗粒检测，小颗粒和稀有亚群也能分辨出来。

### 你将了解到

• 00:00:00 · 00:01:12 · 开场介绍 · 主持人介绍演讲者 Brian Haldeman，Leprechaun 产品经理。
• 00:01:12 · 00:03:17 · EV 表征的挑战 · 样品复杂、颗粒极小（<200 nm）、高度异质、稀有亚群难以识别。
• 00:03:17 · 00:04:08 · 现有技术的局限 · NTA 等技术粒径下限约 50 nm，表型分析能力有限，需预先纯化。
• 00:04:08 · 00:05:10 · Leprechaun 核心能力 · 在单颗粒级别同时测浓度、粒径（35 nm 起）和最多 4 个标志物，不需纯化。
• 00:05:10 · 00:07:06 · 工作流程与 Luni 耗材 · 最多 25 µL 粗样品；泛四跨膜蛋白 Luni 靶向 CD9/63/81，干涉测量加三通道荧光。
• 00:07:06 · 00:08:30 · 样品处理与检测选项 · Luni Washer 自动完成样品处理，可选滴度、荧光表型或自选抗体方案。
• 00:08:30 · 00:10:25 · 数据展示：滴度、粒径与荧光表型 · 逐颗粒分析四跨膜蛋白表达，区分单/双/三阳性亚群。
• 00:10:25 · 00:11:48 · GFP 阳性 EV 掺入实验 · 概念验证：区分总 EV、CD63 阳性和 GFP 阳性亚群。
• 00:11:48 · 00:13:24 · Cargo 分析：内部蛋白和载药检测 · 固定+透化后检测内部 cargo，客户案例：doxorubicin 装载效率测量。
• 00:13:24 · 00:14:45 · 粗样品兼容性与 FlexKit · 动态范围合计 5×10⁵–5×10⁸/mL：孵育 1 小时覆盖 5×10⁶–5×10⁸，孵育 16 小时覆盖 5×10⁵–5×10⁷，FlexKit 自定义捕获抗体。
• 00:14:50 · 00:16:08 · 分析软件与文献 · 自动分析+PDF/Excel 导出，500+ 篇相关文献。
• 00:16:12 · 00:16:52 · 产品总结 · 单次检测给出 EV 的浓度、粒径和表型。
• 00:16:57 · 00:32:21 · Q&A 问答环节 · EV 分离风险、NTA 局限、Leprechaun vs ExoView、cargo 标记、透化影响、试剂盒订购等。
• 了解 Leprechaun 如何把单颗粒干涉成像和免疫荧光结合起来表征 EV 样品