Leprechaun 配备蓝、绿、红三个荧光通道,灵敏度不同,适用的靶标也不同。实际选择时,按靶标丰度选通道,按亮度和交叉干扰选荧光素。
参数 / 蓝色 / 绿色 / 红色
LED 波长:蓝色 470 nm;绿色 567 nm;红色 623 nm
激发范围:蓝色 465–495 nm;绿色 543–568 nm;红色 625–655 nm
发射范围:蓝色 505–530 nm;绿色 580–608 nm;红色 665–725 nm
灵敏度:
绿色和红色通道的背景信号低、荧光素亮度高,灵敏度高于蓝色通道,其中红色最高,适合检测稀有或低丰度靶标。
蓝色通道受蛋白自发荧光影响,背景信号偏高,灵敏度相对较低。所以它适合检测高丰度标记物(如四跨膜蛋白 CD9、CD63、CD81)。高丰度标记物放进灵敏度更高的通道同样能测,外泌体检测流程就把 CD81 和 CD63 分别放在绿色和红色通道。
下表按相对亮度从高到低列出各通道已验证的荧光素。低丰度靶标优先用第一行的荧光素。
相对亮度 / 蓝色 / 绿色 / 红色
蓝色 AF488 / CF488;绿色 AF555 / CF555;红色 AF647 / CF647
蓝色 FITC / emGFP / ZsGreen;绿色 PE / Cy3 / tdTomato;红色 APC / Cy5
蓝色 GFP;绿色 mCherry;红色 —