Leprechaun Flex 常见问题解答

偶联前先核对抗体缓冲液：BSA、胺类和明胶可能干扰偶联反应，只含 PBS 和 0.1% 叠氮钠的缓冲液则不会明显干扰。

Luni 是否需要在偶联后、样品孵育前进行背景扫描？ · 需要。Luni 的背景扫描只能安排在功能化完成之后、样品孵育之前。
含有 BSA、胺类或明胶的抗体能否用于偶联？ · 这些添加剂可能干扰偶联反应，降低捕获效率。请确保所选抗体的缓冲液符合 Leprechaun Flex Conjugation Protocol 中列出的缓冲液要求。
Flex 技术能否用于偶联抗体以外的捕获探针？ · 未经验证。目前该系统只验证了抗体固定化的方案。
Luni 功能化后，距样品孵育最多可以存放多久？ · Luni 可在样品孵育前一天完成功能化，在 4 °C 过夜保存，但需在 24 小时内使用。背景扫描可在功能化当天或样品孵育前进行。
偶联物能否保存？保存多久？在什么条件下？ · 偶联物可以未稀释的形式在 4 °C 保存于 0.5 mL EP 管中。稳定性测试显示，Flex 偶联物在 90 天内不会丧失活性。
Flex Conjugation Kit 可以偶联多少抗体？ · 每管 linker 可偶联 40–100 µg 抗体。linker 本身每管 100 µg，见 Flex Protocol 组件表。
使用自定义抗体时，是否需要对偶联过程进行优化？ · 一般按上述推荐用量偶联即可，但部分抗体可能需要进一步优化，方法见「如何优化偶联效率？」。
慢病毒 Flex 应用中，Flex Linker 1 是否必须偶联自定义包膜抗体、Flex Linker 2 偶联同型对照？ · 是的。即使自定义包膜抗体本身就是 Mouse IgG，也必须将其偶联到 Flex Linker 1；对应的同型对照抗体偶联到 Flex Linker 2。这样才能确保数据在 Leprechaun Analysis 中正确显示。
外泌体 Flex 应用中，如果自定义抗体的同型不是 Mouse IgG1，是否需要将同型对照偶联到另一组 Flex 斑点？ · 是的。Flex Linker 1 偶联自定义抗体，Flex Linker 2 偶联对应的同型对照。外泌体应用中，如果自定义抗体是 Mouse IgG1，Luni 上已有的 MIgG1 同型对照斑点可直接用于设置荧光阈值。此时 Linker 2 可用于偶联第二个自定义抗体。
如果抗体储存缓冲液是含 0.1% 叠氮钠的 PBS，是否需要缓冲液交换？ · 推荐在偶联前对所有抗体进行缓冲液交换。不过，仅由 PBS + 0.1% 叠氮钠组成的缓冲液不会明显干扰偶联反应。
如何优化偶联效率？ · 如果用于偶联的抗体量低于 100 µg，可尝试增加至 100 µg 并观察颗粒计数是否提升。建议通过 IHC 和 IF 等应用预先验证自定义抗体。仅适用于免疫印迹的抗体通常与 Leprechaun 平台的兼容性较差。
外泌体应用中，功能化斑点捕获的颗粒能否检测内部货物（Cargo）？ · 可以。Flex 技术与 Cargo kit 兼容。
Luni 功能化后能否重复使用？ · 不能。Flex Luni 功能化后不能再进行第二轮功能化。
如何手动调整功能化斑点的荧光阈值？ · 如果自定义抗体的同型是 Mouse IgG1，可以使用 Luni 上已有的 MIgG1 斑点设置荧光阈值。如果是其他同型，需将对应的同型对照偶联到 Flex Linker 2，然后基于 Linker 2 斑点设置荧光阈值。
同时在 Luni 上孵育两种抗体偶联物是否有干扰？ · 没有。同时孵育两种抗体偶联物（Linker 1–Ab 和 Linker 2–Ab）不存在已知干扰。
40 µg 抗体可以功能化多少个 Luni？ · 40 µg 抗体偶联后可功能化最多 200 个 Luni（25 个 kit）。
偶联试剂能否单独订购？ · 可以。Leprechaun Flex Conjugation Reagents（货号 251-1051）可独立于 Leprechaun Flex kit 单独订购，包含 2 套 Flex linkers，可偶联一对抗体。