【Webinar】蛋白和 ADC 配方筛选：8 µL 测热稳定和聚集

关于本次 Webinar

Aunty 用 8 µL 样品、在一块 96 孔 SBS 石英板上做高通量、多属性表征。一次实验同时跑全光谱 DSF、SLS 和 DLS，同一批样品的 Tm、Tagg 和 Tsize 都在这次实验里得到，不必为熔解和聚集分别做检测。

样品浓度的下限，讲者在 Q&A 里给了具体数：IgG 用内源荧光最低 25 µg/mL，SLS 50 µg/mL，DLS 0.1 mg/mL。所以候选分子还很少时，就能在多个生物物理指标上同时筛辅料。

Webinar 用两个案例演示这种筛选。第一个对三个抗体和一个酶做 DoE 辅料筛选，回归分析显示 pH 7 最稳。第二个比较 Herceptin、生物类似药 Kanjinti 和两个衍生 ADC（Kadcyla、Enhertu），蔗糖配方比 NaCl 更稳。

### 本场讲到

• 00:00:00 · 00:01:23 · 开场介绍 · 主持人 Alison 介绍讲者 Ross Walton（Unchained Labs 资深应用科学家、Duke 分子遗传学博士）。
• 00:01:23 · 00:01:58 · 盔甲的比喻 · Ross 用中世纪盔甲打比方：好配方就是给蛋白穿的一身盔甲，让它在存储运输里扛得住。
• 00:01:58 · 00:02:40 · 稳定性的两条线 · 构象稳定（去折叠）和胶体稳定（聚集）是两回事，而且改善一条常常牺牲另一条。
• 00:02:40 · 00:04:16 · Aunty 一次实验测什么 · 全光谱 DSF 给 Tm/Tonset，SLS 给 Tagg，DLS 给 Tsize/粒径，再加 kD、B22、G22 和等温长期稳定性。
• 00:04:16 · 00:05:47 · 只要 8 µL · 每样 8 µL、低至 25 µg/mL，96 孔每分钟全读一遍；280/470 nm 双 LED + 660 nm 激光，SLS/DLS 并行采集。
• 00:05:47 · 00:06:55 · SBS 石英 96 孔板 · 6 块石英芯片、9 mm 间距，普通多道枪就能加样；密封只盖进出口、中间开窗不挡光路。含荧光素上样演示。
• 00:06:55 · 00:09:11 · 数据怎么读 · BCM 拐点定 Tm，SLS 抬头定 Tagg，DLS 粒径长大定 Tsize；SLS 看聚集何时开始，DLS 看聚集到多严重。
• 00:09:11 · 00:09:46 · 一个 trastuzumab 的例子 · 两种配方两种失稳路径：一种 Tm1 和 Tagg 重合，另一种 Tagg 跟着 Tm2，第二步去折叠才引发聚集。
• 00:09:46 · 00:11:08 · 案例一：DoE 辅料筛选 · 3 个单抗加一个 30 kDa 的碳酸酐酶，5 因素两水平、III 分辨率部分因子设计，把辅料组合起来一次筛。
• 00:11:08 · 00:12:44 · 热稳定性：热图 + 回归 · 热图显示碳酸酐酶的 Tm 明显低于各单抗，也标出了表现差的配方；回归分析看出 pH 7 最稳，精氨酸、NaCl、蔗糖、PS80 各有影响。
• 00:12:44 · 00:14:24 · 胶体稳定性：kD / B22 · 从浓度升高时扩散变慢还是变快，判断分子间是吸引还是排斥；以 rituximab 为例，热稳定和胶体稳定是互补的两把尺子。
• 00:14:24 · 00:16:20 · 案例二：mAb 与 ADC 对比 · Herceptin、生物类似药 Kanjinti，对比两个衍生 ADC（Kadcyla、Enhertu）；DAR 用 Stunner ADC Decode 确认，蔗糖比 NaCl 更稳。
• 00:16:20 · 00:17:43 · ADC 载荷干扰荧光：改用外源染料 · Enhertu 的 DXd payload 在 280 nm 也发光、盖住蛋白荧光峰，内源荧光（nano-DSF）测不出，改用 SYPRO Orange 外源染料照样测出 Tm。
• 00:17:43 · 00:18:43 · 收尾与自动化 · 8 通道液体工作站上样、自动封板机、API + SiLA 远程控制；Aunty 是 Unchained Labs 生物药产品线的一员。
• 00:18:43 · 00:21:36 · Q&A①：灵敏度·自动化·纯度 · 最低浓度（IgG 荧光 25 µg/mL、SLS 50 µg/mL、DLS 0.1 mg/mL）、能不能上自动化、样品纯度对结果的影响。
• 00:21:36 · 00:24:22 · Q&A②：集成·合规·热循环 · 集成：Unchained Labs 自家的自动化平台 Stuntman 可与 Aunty 集成，讲者表示 TECAN、Hamilton 等其他厂商也都兼容；21 CFR Part 11 合规、升降温热循环、批间差与冻融。
• 00:24:22 · 00:27:58 · Q&A③：长期稳定·甘油·耗材 · 两种降解/长期稳定性做法（等温 vs 取出孵育）、甘油兼容性、96 孔耗材的来源。
• DoE 辅料筛选怎么设计（5 因素两水平），热图和回归分析怎样找出影响稳定性的主要因素
• 热稳定和胶体稳定为什么要一起看：Tm、Tagg 与 kD、B22 在同一批样品上怎样互相补充
• Enhertu 的载荷干扰内源荧光时，怎样改用 SYPRO Orange 测 Tm