上一篇把封好的 Aunty 板准备好了。本篇在 Aunty Client 中设置实验并启动。示例是整板 Tm 和 Tagg 加粒径测定,全部用默认设置。按本篇步骤即可完成第一块板的设置。
屏幕顶部的步骤条列出七个步骤:
每页点右下角「Next」进入下一步,点「Previous」返回上一步。选好应用后,Client 自动带出对应的参数;有特殊实验需求时,每个细节都可以自己设定。
应用类型决定这次实验用哪几种检测。热升温(Thermal ramp)下再分四个子类型。下表列出每种应用调用的检测:
应用类型 / 子类型 / 全光谱荧光 / SLS / DLS
Thermal ramp › Tm & Tagg:
Thermal ramp › Tm & Tagg with reporter dye:
Thermal ramp › Tm & Tagg including sizing:
Thermal ramp › Sizing only:
Isothermal:
Out-of-the-box stability:
Sizing & polydispersity:
Colloidal stability:
Capsid stability:
Freeform:
各应用的实测案例见《Aunty 能做什么?构象、聚集、粒径、胶体和衣壳稳定性实测》;等温实验的案例见《Tm 相近的配方,用等温实验分出稳定性高低》。
打开 Aunty Client,起始页给出两个选项:「Create new」新建实验;「Load method」载入以前保存的方法(Method),直接复用整套设置。本例点「Create new」。
起始页:Create new 新建实验,Load method 载入已保存的方法。
左栏选应用类型,右栏选子类型。本例左栏选「Thermal ramp」,右栏选「Tm & Tagg including sizing」。这个子类型同时调用荧光、SLS 和 DLS 三种检测。
左栏:七种应用类型。右栏:Thermal ramp 的四个子类型。截图高亮的是默认项 Tm & Tagg,本例点第三项。
Experiment info 页有三个字段:
实验信息页。名称已按应用类型和时间自动生成。
Samples 页显示一张 96 孔板图,在上面选择要读的孔。本例读整板,96 孔全选。这一页还有以下按钮:
样品页。绿色为已选孔位。
Temperature profile 页设定升温程序。Tm & Tagg including sizing 的默认值如下:
参数:默认值
起始温度(Start temperature):25 °C
孵育时间(Incubation time):0:30(分:秒)
升温速率(Rate):1.0 °C/min
停留时间(Rest time):0:30(分:秒)
终止温度(End temperature):95 °C
升温速率可在 0.1–10 °C/min 之间设定。程序含 15 °C 步骤时,把实验室温度控制在 25 °C 及以下。
Parameters 页分四块:
区块:本例设置
激发光源(Excitation selection):UV LED(280 nm)已选,激发内源荧光;Blue LED(470 nm)用于激发报告染料
荧光设置(Fluorescence settings):勾选 Auto configuration,LED 功率和采集时间由系统自动设定
SLS 设置(SLS settings):激光功率、衰减和采集时间全部由系统自动设定
DLS 设置(DLS settings):采集次数 1;采集时间 0.25 s;数据过滤器 UL default(最小峰面积 5%,最小直径 0.5 nm);勾选 Auto attenuator,衰减自动调节
以后要重复同样的实验,点右下角「Save method」把整套设置存为方法。下次在第 1 步点「Load method」即可调用。
采集参数页。荧光和 SLS 由系统自动设定;DLS 区显示采集次数、采集时间和数据过滤器。
在 Parameters 页点「Start」,弹出「Start experiment?」确认框。框里按四组列出主要设置:实验参数(温度程序)、荧光设置、DLS 设置和实验信息。
逐项核对无误后,点框内的「Start」开始实验。需要修改时点「Back」返回。
启动确认框:起始 25 °C、升温 1.0 °C/min、终止 95 °C,荧光与 DLS 设置,以及实验名称和创建时间。
实验开始后进入 Status 页,数据边采集边显示。实验结束后,在 Aunty Analysis 中打开数据文件,见第 4 篇。