在 Aunty Client 中设置并启动实验

上一篇把封好的 Aunty 板准备好了。本篇在 Aunty Client 中设置实验并启动。示例是整板 Tm 和 Tagg 加粒径测定,全部用默认设置。按本篇步骤即可完成第一块板的设置。

Client 按七个步骤逐页设置

屏幕顶部的步骤条列出七个步骤:

每页点右下角「Next」进入下一步,点「Previous」返回上一步。选好应用后,Client 自动带出对应的参数;有特殊实验需求时,每个细节都可以自己设定。

应用类型决定这次实验调用哪几种检测

应用类型决定这次实验用哪几种检测。热升温(Thermal ramp)下再分四个子类型。下表列出每种应用调用的检测:

应用类型 / 子类型 / 全光谱荧光 / SLS / DLS

Thermal ramp › Tm & Tagg:

Thermal ramp › Tm & Tagg with reporter dye:

Thermal ramp › Tm & Tagg including sizing:

Thermal ramp › Sizing only:

Isothermal:

Out-of-the-box stability:

Sizing & polydispersity:

Colloidal stability:

Capsid stability:

Freeform:

各应用的实测案例见《Aunty 能做什么?构象、聚集、粒径、胶体和衣壳稳定性实测》;等温实验的案例见《Tm 相近的配方,用等温实验分出稳定性高低》。

第 1 步:新建实验,或载入已存方法

打开 Aunty Client,起始页给出两个选项:「Create new」新建实验;「Load method」载入以前保存的方法(Method),直接复用整套设置。本例点「Create new」。

起始页:Create new 新建实验,Load method 载入已保存的方法。

第 2 步:选 Thermal ramp,子类型选 Tm & Tagg including sizing

左栏选应用类型,右栏选子类型。本例左栏选「Thermal ramp」,右栏选「Tm & Tagg including sizing」。这个子类型同时调用荧光、SLS 和 DLS 三种检测。

左栏:七种应用类型。右栏:Thermal ramp 的四个子类型。截图高亮的是默认项 Tm & Tagg,本例点第三项。

第 3 步:命名实验,确认保存位置

Experiment info 页有三个字段:

实验信息页。名称已按应用类型和时间自动生成。

第 4 步:在板图上选要读的孔

Samples 页显示一张 96 孔板图,在上面选择要读的孔。本例读整板,96 孔全选。这一页还有以下按钮:

样品页。绿色为已选孔位。

第 5 步:温度程序,默认 25 → 95 °C、1 °C/min

Temperature profile 页设定升温程序。Tm & Tagg including sizing 的默认值如下:

参数:默认值

起始温度(Start temperature):25 °C

孵育时间(Incubation time):0:30(分:秒)

升温速率(Rate):1.0 °C/min

停留时间(Rest time):0:30(分:秒)

终止温度(End temperature):95 °C

升温速率可在 0.1–10 °C/min 之间设定。程序含 15 °C 步骤时,把实验室温度控制在 25 °C 及以下。

第 6 步:采集参数大多自动设定,检查即可

Parameters 页分四块:

区块:本例设置

激发光源(Excitation selection):UV LED(280 nm)已选,激发内源荧光;Blue LED(470 nm)用于激发报告染料

荧光设置(Fluorescence settings):勾选 Auto configuration,LED 功率和采集时间由系统自动设定

SLS 设置(SLS settings):激光功率、衰减和采集时间全部由系统自动设定

DLS 设置(DLS settings):采集次数 1;采集时间 0.25 s;数据过滤器 UL default(最小峰面积 5%,最小直径 0.5 nm);勾选 Auto attenuator,衰减自动调节

以后要重复同样的实验,点右下角「Save method」把整套设置存为方法。下次在第 1 步点「Load method」即可调用。

采集参数页。荧光和 SLS 由系统自动设定;DLS 区显示采集次数、采集时间和数据过滤器。

第 7 步:在确认框里核对全部设置,点 Start

在 Parameters 页点「Start」,弹出「Start experiment?」确认框。框里按四组列出主要设置:实验参数(温度程序)、荧光设置、DLS 设置和实验信息。

逐项核对无误后,点框内的「Start」开始实验。需要修改时点「Back」返回。

启动确认框:起始 25 °C、升温 1.0 °C/min、终止 95 °C,荧光与 DLS 设置,以及实验名称和创建时间。

实验开始后进入 Status 页,数据边采集边显示。实验结束后,在 Aunty Analysis 中打开数据文件,见第 4 篇。