上一篇在 Aunty Client 中跑完了一块 Tm & Tagg 加粒径的板。本篇在 Aunty Analysis 中打开一个同类实验(截图示例为 17 种配方的热升温实验),先在整板上比出各孔高低,再逐层深入到单孔曲线和完整荧光光谱。
Aunty Analysis 顶部同样是步骤条,共五步:
每往后一步,看的范围更小、细节更多。可以只看一个样品、几个样品,也可以同时看几块板;不同日期跑的实验也能放在一起叠加比较。
Analysis 列出与 Client 相同的七种应用类型。选这次实验所用的类型,本例选「Thermal ramp」。
Analysis 的应用类型页,与 Client 的七种应用一一对应。
选文件页分三栏:
同一应用类型的实验,一次可同时打开 4 个,便于比较不同批次、不同日期的结果。选好后点「Next」。
选文件页:左栏文件夹,中栏同类实验文件(可选 4 个),右栏已选文件。
Overview 页上方是散点图:横轴是孔位,纵轴是所选参数。左侧下拉菜单切换纵轴参数,如 Tm1;图下方的下拉菜单设定横轴,本例为 Well(孔位)。96 个孔的结果排成一行,哪些孔的 Tm 与多数不同,一眼可见。
下方是板图和分析模式(Analysis mode)。本例的分析模式为 BCM,即用荧光光谱的重心波长计算 Tm。勾选右上角「Enable zoom」可放大图表局部。
整板概览:96 个孔的 Tm1 一字排开,多数在 70 °C 上下,少数孔明显偏低。下方板图标出分析模式 BCM。
Analysis 页显示每个孔的荧光和光散射曲线。左侧 Display 面板控制显示内容:
选项组:可选内容
Graph(曲线):Fluorescence(荧光)、Differential(一阶导数)、SLS、Z-average diameter(Z 均直径);每个孔一次可显示其中一种或两种
Dropline(标记线):在曲线上画出 Tm、Tagg、Tonset、Tsize 的位置
可同时显示并叠加 8 个孔的曲线,适合把同一配方的平行孔、或几个候选配方放在一起比。
下方结果表逐孔列出 Tm1、Tm2、Tm3、Tagg、Tonset、Tsize,以及 UV LED 功率、荧光采集时间等采集设置。
A1 孔(IgG 1 mg/mL)的荧光曲线:BCM 从约 340 nm 升到约 345.5 nm。结果表:Tm1 71.8 °C、Tagg 64.35 °C、Tonset 61.98 °C、Tsize 66.73 °C。
Detailed analysis 页把一个孔的荧光和 DLS 数据并排显示:
BCM 由整条光谱算出。光谱形状本身也带有信息:结构变化、染料信号、载荷释放都会在光谱上留下痕迹。全光谱的实际用法见《内源荧光不足时,用全光谱荧光加染料测热稳定性》。
A1 孔的详细分析。左:BCM 曲线和完整荧光光谱。右:Z 均直径在高温段明显增大;强度分布在约 10 nm 处有一个峰;下方为相关函数。
每个参数的含义和读法见《Aunty 测的每个参数是什么意思?》。
Results 和 Analysis 页的右上角都有「Export」按钮,用来导出结果。看完后点 Detailed analysis 页右下角的「Finish」结束本次分析。