Unagi 软件选好实验类型和样品类型后,一共 4 个步骤页面,按顺序逐页填写:实验信息、样品与缓冲液、实验参数、装载确认。最后一页在操作台上装好耗材、逐项打勾,就可以开始运行。
双击桌面 Unagi 图标启动软件。启动画面过后进入实验设置(Experiment Setup)主界面。
实验设置主界面。左侧选实验类型,右侧选样品类型。
左侧四个按钮对应上一篇介绍的四种实验模式。缓冲液交换为蓝色,缓冲液交换 + 浓缩为绿色,仅浓缩为青色,大体积样品浓缩为黄色。
右侧选样品类型。不同样品类型会影响后续的默认参数(压力、混合速度、每轮过滤去除比例)。Unagi 的默认参数分 6 组,浓度低于 50 mg/mL 时核酸和蛋白共用同一组:
选好后点右下角 Next 进入第一步。
实验信息(Experiment Info)页面:命名实验、选择样品数量和 Una MWCO。
这个页面需要填写:
可选填项:实验描述(Experiment description)记录实验变量或特殊条件,以及 Una 批号(Una lot #)用于追溯。填完点下一步(Next)。
样品与缓冲液(Samples & Buffers)页面:录入每个样品的名称、初始浓度和对应的目标缓冲液。
表格左侧填样品信息,右侧填缓冲液信息:
### 样品列表(Sample List)
- 样品名称(Sample):最长 240 字符,默认 Sample1/2/3...,建议改成有意义的名字
- 初始浓度(Initial Concentration):范围 0.0001–999999999999999,低于 0.009 和高于 999 时自动转为科学计数法。这个值会用于计算最终浓度
- 浓度单位(Concentration Unit):页面顶部选择,可选 mg/mL、ug/mL、ng/mL、vg/mL、cp/mL
### 缓冲液列表(Buffer List)
- 目标缓冲液(Final Buffer):缓冲液名称(最长 240 字符)。注意:Unagi 把相同名称的缓冲液视为同一种,不同样品如果用相同缓冲液,命名要一致
8 个样品可以用 8 种完全不同的缓冲液,也可以多个样品共用同一种。填完点 Next。
实验参数(Experiment Parameters)页面:设置初始体积、交换目标和可选的稀释过滤模式。
这一页定实验怎么跑,核心参数有三个:
### 初始体积(Initial volume)
装入 Una 的样品体积(0.5–8 mL)。所有样品应该尽量用相同的起始体积,体积差异大会影响加压时间校准,导致部分样品过度浓缩。如果不需要浓缩,最终体积设为和初始体积相同。
### 目标交换百分比(Target exchange %)
范围 50%–99.99%,告诉 Unagi 需要替换多少旧缓冲液。常用值:96% 相当于约 3.2 个透析体积(diavolumes)。100% 交换在理论上不可能实现。
### 目标透析体积(Target diavolume)
也可以用透析体积数来设目标,即用多少倍初始体积的新缓冲液来置换。和目标交换百分比是等价的两种表达方式,修改一个另一个会自动换算。
选缓冲液交换 + 浓缩模式时,还要设置最终体积(Final volume)。它是交换完成后继续过滤浓缩到的目标体积。例如初始 8 mL,最终 4 mL 就是 2 倍浓缩。
高浓度蛋白溶液(大约 >100 mg/mL)的粘度大幅升高,直接过滤会很慢。
默认模式下,Unagi 每轮先加压过滤、移除一部分旧缓冲液,样品随之浓缩,然后再补加新缓冲液。
默认模式:先加压过滤移除部分缓冲液,再补加新缓冲液。
勾选 Dilute and Filter 后顺序反过来:先用新缓冲液稀释样品、降低粘度,再加压过滤。
Dilute and Filter 模式:先加入新缓冲液稀释,再加压过滤。每轮循环粘度更低,流速更快。
勾选稀释过滤模式(Dilute and filter mode)后多出稀释液体积(Diluent volume)输入框。
勾选稀释过滤模式(Dilute and filter mode)复选框后会多出一个稀释液体积(Diluent volume)输入框。在这里填每轮循环前加入多少毫升新缓冲液来稀释样品。超出 Una 工作范围的值,软件不接受。
什么时候用:蛋白浓度 >100 mg/mL,或已知样品溶液粘度高、流速慢的情况。对低浓度和低粘度的常规样品,默认模式更高效。
实验参数页面左下角有一个样品参数(Sample Parameters)按钮,点开可以查看和修改更精细的运行参数。
样品参数弹窗:可调节压力、混合速度、混合占空比和吸头复用设置。
默认情况下使用推荐设置(Use Recommended Setting)是勾选的,参数按所选样品类型自动设定。取消勾选后可以手动调节:
各样品类型的默认参数一览:
样品类型 / 压力 / 每轮去除
AAV:压力 15 psi;每轮去除 33%
LNP:压力 60 psi;每轮去除 33%
Protein <0.5 mg/mL / Nucleic acid <0.5 mg/mL:压力 30 psi;每轮去除 33%
Protein 0.5–50 mg/mL / Nucleic acid 0.5–50 mg/mL:压力 60 psi;每轮去除 50%
Protein 50–100 mg/mL:压力 60 psi;每轮去除 33%
Protein >100 mg/mL:压力 60 psi;每轮去除 25%
Unagi 在每轮过滤前后都会用超声波传感器测体积。如果体积超出可检测范围(0.5–8 mL),就会触发 volume measurement error。开始实验前就要决定怎么处理这种情况。
系统设置 → 错误恢复:分别为初始体积误差和过滤后体积误差选择自动或手动处理。
错误恢复设置在左上角菜单 → 系统设置(System Settings)→ 错误恢复(Error Recovery)中,有两种策略:
### 自动模式(Automatic)
仪器自动处理异常并继续运行。适合离开仪器、无人值守的场景。在过滤后体积异常时,交换模式下会使用 Una 内最大可测量值继续计算;浓缩模式下会赋值 0 µL 并补加缓冲液防止跑干。
### 手动模式(Manual)
仪器暂停并打开腔体门,等操作者手动取出样品或选择跳过。适合处理珍贵样品,避免自动模式下的潜在损失。
这个设置是全局的,不按实验单独设,建议第一次使用 Unagi 时就定好。
实验参数设好后点下一步,进入装载确认(Loading Confirmation)页面。这一步要在操作台上装载耗材。
装载确认页面:左侧是操作清单,中间是操作台示意图显示各位置对应关系。
左侧清单逐项操作并打勾:
全部打勾后点开始运行(Start run)。
安全提示:点击开始运行后 Unagi 会立即初始化并移动机械臂,不要把手伸入操作台区域。
### 下一步
→ 运行监控与实验报告
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