Unagi · 全自动缓冲液置换与浓缩（已升级为 Lil' Tuna）

Unagi 已停产，由 Lil' Tuna 接替。Lil' Tuna 沿用同一套压力式 UF/DF，除单根 Una 外还能跑 96 / 24 孔板。本页写给已装机的用户。

了解 Lil' Tuna →

• modes · 四种实验
• how · 工作原理
• una · Una 耗材
• data · 实测数据
• tips · 使用要点
• spec · 规格
• next · 下一步
• 新采购看 Lil' Tuna →
• 耗材清单
• 样品数（并行） · 1–8 · 个 / 次
• 每根 Una 体积 · 0.5–8 · mL
• 回收率（规格） · ≥96 · %
• 装样 + 设参数 · <15 · min
• 代替什么 · 透析（常要过夜）、离心超滤管（反复倒液加液）
• 换完送哪 · 蛋白 → Aunty；AAV → Stunner；LNP → Stunner AF；核酸 → Lunatic
• Run Monitor 界面：8 根 Una 各自的交换百分比 · 换液 · 只换缓冲液，浓度和体积不变
• 换液流程：测体积、加压混匀过滤、测体积、补液循环，最后可选浓缩 · 换液 + 浓缩 · 换完液，接着浓缩到目标体积
• 大体积缩减流程：锥形管里的稀样品分批回填到 Una 再过滤 · 仅浓缩 / 大体积缩减 · 只浓缩不换液；超过 8 mL 先分批回填
• 交换率 · 96.5 · %
• 回收率 · 96.2 · %
• 8 个样品 · 2.3 · h
• 条件 · hIgG 52.3 mg/mL，4 mL × 8 根；每轮去除 66%，3 轮
• 配方筛选 · 同一蛋白一次试最多 8 种缓冲液
• 软件里 · Buffer Exchange
• 图 · Run Monitor 示例（LNP 换液运行中）：8 根 Una 各显示交换率，此刻 49.6–50.0%
• 浓缩 · 8 · 倍
• 终浓度 · 79.3 · mg/mL
• 回收率 · 96.7 · %
• 8 个样品 · 3.3 · h
• 条件 · hIgG 9.9 mg/mL，8 mL → 约 1 mL；交换 97.5%（4 轮）
• 软件里 · Buffer Exchange + Concentrate
• 图 · 官方流程示意：测体积 → 加压 + 混匀 → 测体积 → 补液，循环；最后可选浓缩
• 大体积缩减：最多 · 48 · mL
• 48 → 8 mL 回收率 · 95.5 · %
• 大体积缩减 · Una 装 8 mL，锥形管再装最多 40 mL；48 → 8 mL，再接一次仅浓缩可到 500 µL
• 仅浓缩 · 不换液；缓冲液管放原缓冲液，浓缩过快时补回
• AAV · 稀、流速快，仅浓缩一般 1 h 到数小时，看起始体积；例：AAV9 12 → 1 mL，90 min（Webinar）
• 软件里 · 两种类型：Concentrate Only、Reduce Sample Volume
• 图 · 官方流程示意：锥形管 → 回填 → 加压 + 混匀，循环到样品集中
• 比离心超滤管 · 离心时不混匀，更容易在膜面堆积、丢样
• 不靠扩散 · 旧缓冲液靠压力过膜排出，和透析袋不同
• 选 MWCO · 约为目标分子量的 1/3；AAV、LNP 直接 100 kDa
• RC 还是 PES · RC 与蛋白相互作用小、收率高；样品与 PES 更相容时选 PES
• 预润湿 · PBS、去离子水或样品初始缓冲液 ≥2 mL，静置 ≥2 min，倒出，别用移液器吸；只润湿当天用的
• 存放 · 未拆封 4–25 °C，无保质期
• 50 mL 锥形管 · 901-2020（500 支装）；尺寸合规即可，不限品牌
• 1 mL 吸头 · 901-2031；开吸头复用，每组最多用 12 次
• 完整清单
• 40 支装
• 200 支装
• RC · 10 kDa · 901-2001 · 901-2011
• RC · 30 kDa · 901-2002 · 901-2012
• RC · 100 kDa · 901-2003 · 901-2013
• PES · 30 kDa · 901-2004 · 901-2014
• PES · 100 kDa · 901-2005 · 901-2015
• 8 根之间 · 交换率标准差最大 0.5 个百分点
• 超声体积 · 0.5–8 mL 已用称重法对照（BSA 10 mg/mL）
• 规格 · 回收率 ≥96%、目标浓度 ±10%，都取决于样品和制剂
• hIgG 回收率（两组实测） · 96.2 / 96.7 · %
• 加液 CV（水到 60% 甘油） · ≤1 · %
• 目标浓度准确度（规格） · ±10 · %
• 目标体积
• 终体积（mL）
• AAV9 · 0.5 mL · 0.47 ± 0.02 · 93%
• LNP · 3 mL · 3.1 ± 0.02 · 94%
• ssDNA · 1 mL · 0.94 ± 0.03 · 95%
• BSA · 6 mL · 5.91 ± 0.17 · 99%
• hIgG · 8 mL · 8.13 ± 0.11 · 99%
• 详细排错
• 装样体积 · 和软件里的 Initial volume 一致；各 Una 尽量装一样多
• 浓度差 >2 倍 · 分两批跑；或先完成的暂停取出
• >100 mg/mL · 或粘度高：勾 Dilute and Filter，先稀释再过滤
• 体积报错 · 液面超出超声 0.5–8 mL 检测范围；浓缩模式里流速快的样品最常见
• 手动取样 · 吸头沿壁斜插，别插到底刺穿膜；空位放盖帽再点 Continue
• 乙醇 >10% · 减装量或降混匀转速，先小批试
• 日常清洁 · 温和清洁剂或 10% 漂白液擦，再用水或 70% 乙醇或异丙醇擦掉残留
• 关机顺序 · 先关软件、再关电脑、最后关仪器
• 安装 · Unchained Labs 工程师安装；挪动位置后需重新校准
• 场地 · 18–28 °C，0–70% RH（非冷凝）；后方距墙 ≥10 cm，左侧留 ≥15 cm
• 预设 · 32 种，按分子和实验类型组合
• 运行时间条件 · 实测：hIgG 4 mL 换液；8 mL 换液后浓缩 8 倍。规格：8 mL、10 mg/mL IgG
• 体积范围 · 0.5–8 mL（每根 Una）
• 样品数 · 1–8 并行
• 样品浓度 · 最高 200 mg/mL（取决于样品和制剂）
• 交换率 · 50%–99.99%，或最多 10 个透析体积
• 回收率 · ≥96%（取决于样品和制剂）
• 目标浓度准确度 · ±10%
• 体积范围
• 0.5–8 mL（每根 Una）
• 1–8 并行
• 样品浓度
• 最高 200 mg/mL（取决于样品和制剂）
• 50%–99.99%，或最多 10 个透析体积
• ≥96%（取决于样品和制剂）
• 目标浓度准确度
• 换液压力 · 15 / 30 / 60 psi
• 混匀转速 · 0–1000 rpm（优化值 700 rpm）
• 最大浓缩 · 48 mL → 500 µL（大体积缩减 + 仅浓缩）
• 气源 · 洁净干燥空气或氮气，80–100 psi
• 电源 · 100–260 V AC，50/60 Hz
• 尺寸 · 63 × 57 × 66 cm
• 重量 · 65 kg
• 换液压力
• 15 / 30 / 60 psi
• 混匀转速
• 0–1000 rpm（优化值 700 rpm）
• 最大浓缩
• 48 mL → 500 µL（大体积缩减 + 仅浓缩）
• 洁净干燥空气或氮气，80–100 psi
• 100–260 V AC，50/60 Hz
• 63 × 57 × 66 cm
• 换液（实测） · 2.3 h
• 换液 + 浓缩（实测） · 3.3 h
• 规格（8 mL，10 mg/mL IgG，换到 96%） · ~4.5 h
• MWCO 怎么选，Una 怎么预润湿？ · UF/DF 与 Una
• 参数怎么设，什么时候勾 Dilute and Filter？ · 软件操作
• 报 Volume Measurement Error 怎么办？ · 维护与排错
• Raw Report 里的字段各是什么意思？ · 运行监控与报告
• 换液、浓缩、48 mL 大体积，回收率各多少？ · 三个 hIgG 实验
• LNP 去乙醇、AAV 换液，样品会变吗？ · LNP / AAV
• 新采购：Lil' Tuna 多了什么？ · Lil' Tuna
• 全自动缓冲液置换与浓缩 · 已升级
• 加样、设参数，其余自动完成
• 压力驱动 UF/DF：自动过滤、测体积、补液，最多 8 个样品并行。
• 代替什么透析（常要过夜）、离心超滤管（反复倒液加液）换完送哪蛋白 → Aunty；AAV → Stunner；LNP → Stunner AF；核酸 → Lunatic
• 四种实验类型，开机先选一种
• 选哪种决定后面所有设置；8 根 Una 各自独立。
• 想深入UF/DF 原理与 Una →三个 hIgG 实验 →比离心超滤管离心时不混匀，更容易在膜面堆积、丢样不靠扩散旧缓冲液靠压力过膜排出，和透析袋不同
• 样品进了 Una，每一轮发生什么
• 选 MWCO约为目标分子量的 1/3；AAV、LNP 直接 100 kDaRC 还是 PESRC 与蛋白相互作用小、收率高；样品与 PES 更相容时选 PES预润湿PBS、去离子水或样品初始缓冲液 ≥2 mL，静置 ≥2 min，倒出，别用移液器吸；只润湿当天用的存放未拆封 4–25 °C，无保质期
• 选 Una：先定膜材，再定截留分子量
• 一根一个样品，0.5–8 mL；每根出厂做过 60 psi 压力测试。
• 50 mL 锥形管901-2020（500 支装）；尺寸合规即可，不限品牌1 mL 吸头901-2031；开吸头复用，每组最多用 12 次完整清单/device/unagi耗材清单 →
• Unagi 操作台，标注 6 个功能区
• 图 1a操作台：① 缓冲液管架 ② 加压交换腔体 ③ Una 样品架 ④ 移液通道 ⑤ 超声体积传感器 ⑥ 吸头架
• IgG 回收率 ≥96%，AAV、LNP、核酸实测 93–95%
• 8 根之间交换率标准差最大 0.5 个百分点超声体积0.5–8 mL 已用称重法对照（BSA 10 mg/mL）规格回收率 ≥96%、目标浓度 ±10%，都取决于样品和制剂
• 详细排错维护与故障排除 →参数页从打开软件到运行 →
• 报错和偏差，多半出在装样和样品搭配
• Experiment Parameters 页面：初始体积、目标交换率、稀释过滤模式
• 图 2Experiment Parameters：Initial volume 8 mL，Target exchange 96%，下方是 Dilute and filter mode 复选框
• 安装Unchained Labs 工程师安装；挪动位置后需重新校准场地18–28 °C，0–70% RH（非冷凝）；后方距墙 ≥10 cm，左侧留 ≥15 cm预设32 种，按分子和实验类型组合运行时间条件实测：hIgG 4 mL 换液；8 mL 换液后浓缩 8 倍。规格：8 mL、10 mg/mL IgG
• 运行时间
• 按手上的问题读下一篇

超声传感器

液面高度→ 体积蛋白（截留）旧缓冲液新缓冲液超滤膜正压15 / 30 / 60 psi轨道混匀滤液：水、盐等小分子新缓冲液手动加样 0.5–8 mL预润湿后装样，放入腔体超声先测初始体积Una 剖面 · 放大示意 · 比例非实物1–8 根 Una 并行一根一个样品，各自测体积、补液每根 0.5–8 mL手动预润湿、装样，放入加压腔体体积在降，蛋白留下每轮去除比例可设，此处取 66% · 示意体积时间 →剩 34%滤出：水、盐等小于 MWCO 的小分子留下：蛋白等大分子，浓度升高过滤同时混匀，防止大分子堆在膜面液面高度 → 体积加压停下，超声非接触测一次 · 示意34%初始按实测体积算交换率、定补液量调下一轮按实际去除量调加压时间补回初始体积移液通道从锥形管吸新缓冲液- 过滤后

• 补液后

新 66%旧旧 34%旧缓冲液占比 100% → 34%循环，直到目标交换率交换率目标 96%

可选浓缩不补液1 − 0.34³ ≈ 96%示意；hIgG 实测 3 轮，96.5%

• 装样 · 测初始体积
• 加压过滤 + 混匀
• 超声测体积
• 补新缓冲液
• 循环 · 可选浓缩
• 仪器读数示意