在 Stunner 上建一个实验,要在 Stunner Client 里走完选应用、DLS 采集设置、板布局、样品分组和样品信息几步,结果再到 Stunner Analysis 里看。Stunner 和 Lunatic 共用同一套软件,UV/Vis 部分的操作完全一样;差别集中在 DLS 采集设置和样品信息两节,所以已经会用 Lunatic 的用户重点看这两节即可。
Stunner 的软件分两个独立程序,前一个管测量,后一个管数据:
两个软件共用同一套账户系统。第一次打开会要求创建管理员账户,之后同事可以用各自的账号登录,数据按用户隔离。
软件界面右上角会显示仪器连接状态和当前安装的光学模块(UV/Vis、RADLS & Fluorescence)。模块显示灰色,说明软件没识别到这部分硬件,要先检查连接再继续。
Stunner Client 主界面。6 个样品类型入口:Protein、Nucleic Acids、Viral Vectors、Nanoparticles、Other、Homebrew。
点击样品类型卡片后进入 Select Application 界面。以 Protein 为例,你会看到三列选项:
选好应用后点 Next 进入下一步。应用一旦选定,后面 DLS 采集参数的默认值和可选范围也跟着定了,所以要先确定测什么再选。
Protein 类应用选择界面。左列仅 UV/Vis,中列 UV/Vis + DLS,右列特殊应用。
Experiment Info 界面先填实验名称。Advanced load settings 影响灌注;DLS acquisition settings 决定信噪比和测量时长。
这里有个 Quick load 选项。高浓度样品(粘度大、灌注慢)可以勾选,仪器会调整真空时序加快灌注。普通样品不要勾,因为 Quick load 对低粘度样品反而可能引入气泡。
Stunner 提供三个选项:
角度数的默认值随应用而定:标准 DLS 应用是 1 个角度,RADLS 应用是 7 个角度。Custom 模式下可以手动调整,但没有特殊需求建议保持默认。
自定义的采集参数可以通过 Save acquisition settings 保存下来,保存后与当前用户和应用绑定。下次建同类实验时直接调用即可。
Experiment Info 界面。Lunatic 没有 DLS 采集设置;Default 适合大多数实验,低浓度或小分子样品切到 Detailed。
Plate Layout 界面用 96 孔板示意图来指定哪些孔位是 Blank、哪些是 Sample。左侧选择类型,再在板图上拖拽标记,操作和 Lunatic 一样。
Blanking 方式选错,浓度和粒径结果都会带上系统偏差。不同应用的做法不同:
建议每个实验至少标 1 个 blank 孔,除非你打算用 Stored blanks。
之前测过的 blank 可以存下来复用,有效期 100 天或直到下次仪器校准(以先到者为准)。每天测同一种缓冲液的实验室用它,可以省掉每次加 blank 的工作量。更详细的 blanking 策略可以参考 Lunatic 建实验流程,UV/Vis blanking 部分完全通用。
点「+」号可以添加多块板,但装板时一次只装一块,因为叠板会损坏仪器。第一块板上标的 blank 适用于后续所有板,不用每块板都重新标。
板布局支持导出到 Excel 编辑后再导入回软件,适合重复实验批量设置。
Plate Layout 界面。左侧选 Blank(蓝)或 Sample(绿),在板图上拖拽指定位置。
标完孔位后,下一步是指定「哪些样品用同一种蛋白和缓冲液」,这就是 Sample Group。每个 Group 共享一组 blank 和一套 Analyte/Buffer 参数,最多可以建 12 个 Group。
什么时候需要分多个 Group?最常见的情况是板上有几种蛋白:它们的消光系数不同,混在一个 Group 里浓度就算不准。所以每种蛋白单独建一个 Group,各自绑定正确的消光系数。
B₂₂ & kD 实验比较特殊:每个 Sample Group 对应同一个蛋白的浓度梯度系列(4–5 个浓度)。软件用每个 Group 的梯度拟合作图,评估蛋白分子间的相互作用,所以同一梯度的所有浓度点必须放在同一 Group 内。
Sample Groups 界面。左侧创建分组(Sample Group 1/2),板上用不同颜色区分。每个 Group 绑定各自的 Blank 和 Analyte。
DLS 实验必须为每个 Sample Group 选择 Analyte 和 Buffer,这一步不能跳过,因为软件要用这些信息校正 DLS 结果。
下拉列表里有常用蛋白预设(IgG、BSA 等)。如果你的蛋白不在列表里,去 Options > Analytes & Buffers 自建条目,填入分子量和消光系数即可。
Edit Samples 界面。每个 Sample Group 从下拉菜单选择 Analyte(如 IgG、BSA)和 Buffer(如 PBS、Water)。
预设有 PBS、Water 等常用缓冲液。粘度数据存在 Buffer 设置里。DLS 通过布朗运动的扩散速度反推粒径,而扩散速度和溶液粘度直接相关。软件用所选 Buffer 的粘度值做校正;选错 Buffer,粒径就会按错误的粘度算,系统性偏大或偏小。
自建 Buffer 时需要手动输入粘度值(单位 cP)。不确定粘度时,可以用水的粘度(0.89 cP @ 25°C)近似;缓冲液粘度越高,这样带来的误差越大。
同一个 Sample Group 里有时会混入不同蛋白(不推荐),这时可以在 Edit Samples 界面逐个填写 E1%(消光系数)。这些信息也可以用模板预填。
加样操作的具体手法和注意事项可以参考 Stunner Plate 和加样操作。
接下来是 Overview 界面,汇总了全部实验设置。核对应用名、板数、样品数、blank 数和 DLS 采集参数,无误后点 Next。
Overview 界面。确认应用名、板数、样品数、Blank 数和 DLS 采集设置无误后点 Next。
Load Plate 界面提示你装板。板的 A1 孔位在右上角,和常规微孔板方向相反,第一次用容易装反,要看清板上的标记。可以选择 User ID 或 Barcode 来校验板的身份。
Load Plate 界面。彩色标记显示哪些孔位有样品。装板后点 Start 开始测量。
点 Start 开始测量。测量过程中界面会显示进度条和当前正在测的孔位。
如果中途需要终止,点 Abort。当前这块板的数据不会保存,但多板实验中后续板的数据不受影响,可以继续测。
测量完成后 Stunner Analysis 会自动打开实验结果。
### 下一步
→ DLS 结果怎么看
→ Stunner 各应用怎么跑