Stunner 能做什么实验——AAV、LNP、蛋白表征

Stunner 各应用怎么跑

AAV 满衣壳比、LNP 包封率、蛋白浓度加粒径、B₂₂/kD，这四类数据在 Stunner 上都是每孔 2 µL 测出来的。四个应用的差别在软件入口、要填的参数和结果读法；建实验的通用流程和 DLS 结果的通用读法见前面几篇。

AAV Quant：建实验

Step 1：选应用

Home 界面点 Viral Vectors，再在 Select Application 界面选 AAV Quant（腺病毒选 Adeno Quant），然后点 Next。

Step 2：设 DLS 采集参数

Experiment Info 界面可以选 DLS 采集方案。多数实验用列表里的 Default (5×4s×7 angles) 即可；样品浓度很低或分子很小时，再增加角度数、采集次数和采集时间。

Step 3：选 Analyte

下拉菜单预设了 AAV1 到 AAV10 共 10 种 AAV 血清型，选对应的型号即可。每种血清型的衣壳直径、分子量、蛋白亚基数量和比例都已经配好了。

血清型不在列表里时（比如工程改造的衣壳），可以自建 Analyte：Options > Analytes > 输入衣壳直径、分子量、蛋白亚基数量和比例。

Adeno Quant 默认提供 1 种 Analyte：AdV5 CMV-eGFP。

AAV Quant Analyte 配置界面。左侧选择预设的血清型（如 AAV2），右侧可查看和编辑衣壳参数（分子量、亚基组成、吸收光谱）。

Step 4：填 DNA 大小

Edit Samples 界面要填载体 DNA 的大小。AAV 填 ssDNA 碱基对数，Adeno 填 dsDNA 碱基对数。这个数值直接影响核酸浓度的计算，务必填准。

Step 5：板布局和运行

和通用流程一样：在板图上标好 Blank 和 Sample 的位置，点 Next 进入 Overview 确认所有设置。然后 Load 加样、Start 开始测量。

AAV Quant：看结果

测量完成后，概览面板把同一个孔的 DLS、SLS 和 UV/Vis 数据并排放在一起，粒径、滴度和满衣壳比可以对照着看。

AAV Quant 三合一概览。左：DLS 粒径分布（Capsids + Aggregates）；中：SLS 散射强度-滴度线性关系（绿=满衣壳，蓝=空衣壳）；右：UV/Vis 光谱分解（总光谱 = 蛋白 + DNA 贡献）。

点击单个样品，可以展开详细结果页面：

AAV Quant 详细结果（纯 AAV2 样品）。左上：滴度柱状图（Total/Full/Free protein/Free DNA）；右上：满衣壳比饼图（%Full = 100%）；左下：UV/Vis 吸收光谱分解；右下：DLS 强度分布（Capsids 74.1% + Aggregates 25.9%，衣壳直径 27.8 nm）。

关键结果字段

字段 / 含义 / 单位

Full capsid titer:含义 含 DNA 的完整衣壳滴度;单位 vg/mL

Empty capsid titer:含义 空衣壳滴度;单位 cp/mL

Total capsid titer:含义 所有衣壳总滴度;单位 cp/mL

%Full / %Empty:含义 满/空衣壳百分比;单位 %

Empty/Full ratio:含义 空满比（越低越好）;单位 —

Assembled protein:含义 组装为完整衣壳的蛋白占比;单位 %

Capsid diameter:含义 衣壳粒径;单位 nm

Aggregate intensity:含义 聚集体在强度分布中的占比;单位 %

LNP 包封率：建实验

脂质纳米颗粒（LNP）的包封率（EE%）是包进颗粒的核酸占总核酸的比例。

前提：EE% 要靠荧光通道测游离核酸，所以只能在带荧光通道的 Stunner AF 上做。

Step 1：选测量类型

Home 界面点 Nanoparticles，弹出窗口在 With EE% 和 Without EE% 之间选 With EE%。

Step 2：选应用

按需要的数据深度选一个应用：

RNA-LNP 系列用于脂质纳米颗粒，Nanoparticle 系列用于其他类型纳米颗粒。

Step 3：板布局

EE% 实验的板上要放 4 种孔，比一般应用复杂：

软件推荐的布局是 12 个样品各做三重复，再加一条 6 点标准曲线，见下图。追求通量时，一整块板最多放 44 个样品和 4 个标准品（双孔）。

LNP EE% 推荐板布局。蓝=Blank（缓冲液），黄=Reference（RNA 标准品+RiboGreen），绿=Sample+Fluo（LNP 样品），紫=Sample（不含 RiboGreen 的 LNP 样品用于 UV/Vis 和 DLS）。

Step 4：选 Payload 和 Buffer

Edit Samples 界面，为每个 Sample Group 选择 RNA Payload 类型（如 mRNA）和 Buffer（如 PBS）。这些参数会影响 UV/Vis 光谱的解析方式。

LNP 包封率：看结果

LNP EE% 详细结果。左上：EE% 柱状图（91.9%）；右上：UV/Vis 吸收光谱；左下：RiboGreen 荧光标准曲线；右下：DLS 强度分布（Z-Avg 72.3 nm, PdI 0.08）。

关键结果字段

蛋白浓度 + 粒径

Step 1：选应用

Home > Protein > Protein + Sizing。

测细胞裂解液选 Protein (Lysates) + Sizing；测 ADC，选 ADC + Sizing。

Step 2：其余步骤

其余步骤和通用流程相同：Experiment Info、Edit Samples、板布局、Overview、Load、Start，不需要额外参数。

结果

软件同时报浓度（mg/mL）和粒径（Z-Avg nm + PdI）。传统做法需要分光光度计测浓度、DLS 仪器测粒径，两台设备各测一次。Stunner 一次加样 2 µL，一个板孔同时拿到两组数据。

B₂₂ 和 kD：浓度梯度实验

开发高浓度抗体制剂，要先弄清蛋白分子之间是净排斥还是净吸引，因为互相吸引的分子在高浓度下容易聚集。B₂₂（第二维里系数，衡量分子间相互作用的热力学参数）和 kD（扩散相互作用参数）就是量化这件事的指标。

Step 1：选应用

Home > Protein > B₂₂ & kD。

Step 2：设计浓度梯度

这是 B₂₂/kD 实验和其他应用最大的区别。两个参数都从信号随浓度的变化拟合出来，所以需要准备同一个蛋白的 4-5 个浓度点，跨 3-5 倍范围。

在板布局里，同一个蛋白、同一缓冲液的所有浓度点放进同一个 Sample Group，软件按组做拟合。所有 Sample Group 共享同一组 Blank。

B₂₂/kD Sample Groups 设置。图中 3 个 Sample Group 用不同颜色标出在板上的位置。

Step 3：Edit Samples

为每个 Sample Group 选择对应的 Analyte 和 Buffer。Buffer 的粘度校正在这个实验里特别关键，扩散系数的计算依赖准确的溶剂粘度值。

B₂₂/kD Edit Samples 界面。每个 Sample Group 选择对应的 Analyte 和 Buffer。

结果怎么看

软件自动完成两个拟合：SLS 散射强度随浓度的变化拟合得到 B₂₂，DLS 扩散系数随浓度的变化拟合得到 kD。实验这一侧只需配好浓度梯度、加样、测量。

### 下一步

→ 维护、校准和常见问题

→ DLS 是怎么测的：原理详解