测量完成后 Stunner Analysis 自动打开。UV/Vis 结果和 Lunatic 的读法一样。DLS 数据分三处看:Overview 快速筛选异常样品,Details 看粒径分布,Advanced DLS 检查原始采集数据的质量。
拿到 DLS 数据,先回答三个问题:
### 我的样品有多大?
看 Z-Avg Dia(Z-average 粒径)。蛋白单体一般 5–15 nm,AAV 衣壳 20–30 nm,LNP 50–200 nm,先拿这个数和样品类型的典型范围比。
### 样品均一吗?
看 PdI(多分散指数),它反映粒径分布有多宽,分档见下文「关键数字怎么读」的表。
### 有没有聚集?
看强度分布图(Intensity distribution)。主峰右侧、粒径更大的位置如果出现第二个峰,那就是聚集体。强度分布对聚集体很敏感,质量占比极小的聚集体也能在这里形成一个峰。
Overview 是默认标签页,整块板的缩略图平铺在一屏上。
要回答前两个问题(多大、均一吗),把右上角下拉菜单切到 Intensity (Z Avg Dia) 视图。每个孔位会显示粒径分布缩略图和 Z-average 值。扫一遍全板,先把可疑的孔挑出来。Z-average 和同类样品的预期值差很远的,说明样品或这次测量有问题;分布图出现双峰或宽肩的,多半有聚集或多种组分。数值彼此一致的孔可以先放过。
其他三种视图供参考:Absorbance (Concentration) 是默认的 UV/Vis 浓度视图;Mass 和 Numbers 是按质量和颗粒数量加权的分布,加权角度不同,适用场景也不同,详见 DLS 原理篇。
Overview 标签页。右上角下拉菜单切到 Intensity (Z Avg Dia) 视图,可以快速扫描全板的粒径分布和 Z-average 值。
缩略图上偶尔会出现标记:N/A 表示 blank 孔位;× 表示测量失败(样品太黏、含洗涤剂等);! 表示该孔两个比色皿中有一个采集失败。多个孔位规律性出现 × 时,要考虑真空垫或泵的问题。
在 Overview 里双击可疑的样品,进入 Details 看细节。
界面分三栏:左侧是样品导航树(按孔位或 Sample Group 分组),中间是主图区,右侧是缩略图。
哪张图回答哪个问题:
### 有多大 → 看强度分布图(绿色)
主峰的位置就是样品的粒径。正常的蛋白单体应该是一个窄窄的尖峰。
### 有没有聚集 → 还是看强度分布图
强度分布上的聚集体峰是被放大过的。散射强度 ∝ 粒径⁶,对球形颗粒也就是和分子量的平方成正比,所以峰看着大,实际质量占比很小。切到质量分布(蓝色)可看到真实比例。
### 均一吗 → 看 Results 表里的 PdI
PdI 在主图下方的结果表里,怎么判读见下文「关键数字怎么读」的表。
其他几张图的作用:吸收光谱(黑色)是 UV/Vis 数据,和浓度相关;数量分布(紫色)按颗粒个数加权,会压制大颗粒的信号;Guinier plot(黄色)是 SLS 数据,大部分日常场景不需要看。
点击右侧缩略图可以把对应的图放大到主位置。按住 Ctrl 点击左侧导航树里的多个样品,图会叠加在一起方便对比。
Details 标签页。中间主图当前显示强度分布(绿色)。右侧缩略图可以切换查看其他分布和 Guinier plot。下方 Results 表报告 Z-Avg、PdI 等关键数值。
Details 下方的 Results 表字段很多,日常只需要看三个:
字段 / 告诉你什么 / 怎么判读
Z-Avg Dia. (0°):告诉你什么 样品的平均粒径;怎么判读 蛋白 5–15 nm,AAV 20–30 nm,LNP 50–200 nm。偏离这些范围时,回 Details 看分布图
PdI:告诉你什么 粒径分布有多宽;怎么判读 ≤ 0.1 很均一;0.1–0.2 中等多分散,有少量杂峰;> 0.2 分布很宽,可能有聚集或多种组分
PkOI Intensity Mean Dia.:告诉你什么 分布图中主峰的粒径;怎么判读 和 Z-Avg 接近说明单分散,差得多说明有多个组分
Z-average 按散射强度加权,把所有散射体的贡献算成一个平均粒径,大颗粒的权重高。PkOI 只取分布图中主峰的粒径。
单分散样品(PdI 很低)两者接近;多分散样品(比如有聚集体)两者差距会拉大。如果 Z-average 比 PkOI 大很多,说明分布里有大粒径的拖尾把平均值拉高了。
Results 表里还有 PkOI Intensity Area(主峰面积占比)、PkOI Rayleigh ratio(用于 SLS 计算)、PkOI Est. MW(估算分子量)等字段。大部分日常实验只需要关注上面三个。
如果 Z-Avg 或 PdI 的值看起来不合理,或者强度分布的形状很奇怪,问题可能不在样品。某次采集可能被灰尘或气泡干扰了。在 Advanced DLS 标签页可以检查每一次原始采集的质量。
日常使用中,默认的 Automatic acquisition selection 和 Automatic angle selection 已经过滤了离群值。只有下面几种情况才需要手动检查:
界面结构:左侧按角度展开,显示每次采集的勾选框;中间是逐次采集的 correlogram(自相关曲线);右下表格汇总每个角度的状态。取消勾选某次异常采集后,软件会实时重新计算结果,被排除的采集在图上显示为灰色。
其他常见困惑
- 光谱出现负值或形状歪了:很可能是 Unmix 应用(一种用光谱反卷积测多组分浓度的模式)用了缓冲液做 blank。这会导致 overblanking。Unmix 必须用水做 blank。
- 想对比复孔重复性:在 Details 左侧导航树切到"按 Sample Group 分组"视图。再 Ctrl + 点击同组的多个复孔,图会叠加显示。
- 孔位标错了:无需重测,点右侧"编辑实验"按钮,重新定义 blank/sample 孔位和 Sample Group,软件会重新计算。板类型和样品大类不能改。
数据确认无误后,可以用三种方式导出结果:
### 下一步
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