Lunatic 每个样品只用 2 µL,加样手法直接决定数据质量。条带没装到位会损坏仪器;样品不均匀,读数就偏离真实浓度;加样量或角度不对,微比色皿充液就不正常。
先把条带装到板架上,再加样:板架底色是黑的,加过样的孔位和空孔位容易分辨。
条带底部有定位销,表面印有三角方向标记,两者配合限定了唯一的安装方向。对准了轻轻按下去就到位,如果方向反了就插不进去。不要强行塞:条带没装到位的板放进仪器,会损坏仪器。
条带上架对齐。定位销(红框)和三角方向标记(绿框)保证条带只能以正确朝向装入板架。
2 µL 的取样量意味着样品必须完全均匀。气泡、沉淀、管壁挂液,任何一种不均匀都会让这 2 µL 偏离真实浓度。加样前按以下四步处理样品:
Step 3 容易被省略。混匀之后管壁上挂着液滴,管底可能有微小气泡。这时候直接吸样,取到的浓度可能和管内主体液有差别。短暂离心(2–3 秒够了),把挂液甩回管底、赶走气泡,再取样。
反向移液(reverse pipetting)是推荐的加样方式。和正向移液相比,区别在于吸液时按过第一档,吸入的量比设定值稍多。释放时只按到第一档:多出的那部分液体留在枪头里,不会挤出气泡。具体操作:
建议使用量程 0.5–5 µL 的精密移液器,配对应的精密枪头。大量程移液器(比如 20 µL 或 200 µL 档位)在 2 µL 这个体积上精度不够。
左:反向移液的推杆行程示意:Release position(释放位)、First stop(第一档)、Second stop(底部)。右:枪头以 45° 角接触加样孔。
精确加入 2 µL加样量必须是 2 µL。少了,储液腔充液不足,微比色皿可能没有完全充满;多了,多余的样品留在敞口的加样孔里,蒸发会改变浓度。可接受的体积偏差见条带规格(Lunatic Plate 为 30%,High Lunatic Plate 为 20%)。
不同样品之间换枪头共用枪头会引入交叉污染。同一样品加重复孔可以用反向移液的连续加样方式(Step 4),不需要中途换枪头。
45° 角,不要垂直插入枪头垂直插入可能把样品压进微流控通道(forced filling)。这样会绕过正常的毛细自灌注流程,影响测量结果。倾斜 45° 让样品自然流入加样孔即可。
加样后 2 小时内测量条带的密封设计可以在常温下抑制蒸发约 2 小时。超过这个窗口,储液腔内的样品浓度可能因蒸发而偏高。
加样完成后把板放到仪器托盘里。A1 朝右上角:板架和整板上都有 A1 标记,和托盘里的定位对上就行。放好后确认板没有歪斜,再关闭托盘。
微流控板装入仪器托盘。绿色方框标记 A1 位置(右上角)。
不要叠板。软件允许在一个实验里定义多块板,但每次只能放一块板进仪器。叠放会损坏仪器。
测量结束后托盘自动弹出,30 秒后自动收回。来得及就直接取;来不及的话,到 Client 软件里点 "Open tray" 重新打开。
托盘收回的时候不要伸手去拿板,等它完全关好之后通过软件重新打开更稳妥。