Lunatic 用 2 µL 样品覆盖 0.02–200 mg/mL，下面四种场景的实验都在 High Lunatic plate 上测得。纯化 BSA 用 A280；0.1–200 mg/mL 单抗梯度用高浓度 IgG 外推算法；混了 DNA 的 BSA 用 Unmix 去杂质；BCA 显色样品直接跑比色测定。范围的低端 0.02 mg/mL 来自 BCA 比色测定，A280 场景实测从 0.1 mg/mL 起。
Lunatic（A）SBS 兼容板格式，5 分钟读取最多 96 个样品。Little Lunatic（B）芯片格式，2 分钟读取最多 16 个样品。
杂质很少的纯化蛋白，直接用 A280 定量就够。Lunatic 的 Protein (Turbidity) 应用在全光谱上做瑞利散射校正，传统做法只在单一波长上扣除背景。校正后取 280 nm 吸光度，结合蛋白特异性的 E1% 消光系数计算浓度：
c = (OD280 × 10) / E1%
实验：BSA 在 PBS (pH 7.4) 中，软件中 E1% 设为 8
25 mg/mL BSA，2 µL × 3 次重复，High Lunatic plate，PBS 空白。分别用 Protein (Turbidity) 和 Protein (Single point) 应用测量。
Protein (Turbidity)
25.83 ± 0.02
mg/mL
Protein (Single point)
27.22 ± 0.01
mg/mL
Single point 应用报告的浓度略高。浊度校正能在全光谱上处理散射背景，而单波长扣除（340 nm）只在一个点上做校正，对轻微浑浊样品的处理不够精细。
BSA 在 Protein (Turbidity) 应用下的吸收光谱。黑色曲线为基线校正后的 UV/Vis 光谱，灰色为浊度分布。插入表格对比两种应用的浓度结果。
生物治疗药物开发中，为了减小注射体积同时保持有效剂量，蛋白制剂的浓度越做越高。浓度一高，粘度和浊度跟着升高，A280 也很快超出常规比色皿的读数范围，只能先稀释再测。
High Lunatic plate 配有 0.1 mm 和 0.7 mm 双光程微比色皿。样品通过毛细作用进入储液腔，再由 Lunatic 泵送入比色皿。粘度在 40 cP 以内的样品都能正常处理，本文的单抗梯度覆盖 0.1–200 mg/mL。浊度校正按瑞利散射特征逐波长处理。
IgG (High concentration) 应用更进一步：当吸收光谱超过 275 OD 检测上限时，它根据全长 IgG 的光谱形状做外推，使用固定 E1% = 13.7 计算浓度。
实验：单抗梯度稀释
重量法配制 11 个浓度（200, 160, 120, 100, 80, 60, 40, 25, 10, 1, 0.1 mg/mL），4 次重复，High Lunatic plate，IgG (High concentration) 应用。
（A）11 个浓度单抗的全光谱叠加。（B）外推 A280 OD 值 vs. 目标蛋白浓度，y = 1.3786x，R² = 0.9987。灰色区域为 Lunatic 线性范围上限（275 OD）。误差线为 4 次重复的 SD。
在低浓度端和超过 275 OD 饱和区的高浓度端，重复间 SD 都很小。进入光谱饱和区之后，外推的 A280 和目标浓度仍成线性（R² = 0.9987），所以 200 mg/mL 的单抗可以直接测。
细胞裂解物里混着核酸、缓冲液组分、去垢剂、细胞碎片，这些杂质各有自己的吸收特征，会干扰 A280 读数。Protein (Lysates) Unmix 应用针对这种场景设计：用专有的解卷积算法分析原始吸收光谱，把蛋白的贡献从杂质中单独分离出来。
内置的杂质模型涵盖叠氮化物、去垢剂、核酸、多糖和通用蛋白酶抑制剂。纯化蛋白和含杂质的粗样品都适用。
实验：BSA + DNA 混合样品
BSA ~20 mg/mL (PBS, pH 7.4) + 小牛胸腺 DNA (TE, pH 7.4)，模拟含核酸污染的蛋白样品。2 µL × 3 次重复，High Lunatic plate，水空白，E1% = 8。
> 12.98Conc (mg/mL)
> 1.05Impurities (A280)
> 0.00Background (A280)
Unmix 识别出 DNA 杂质（在 260 nm 有吸收峰），把它从蛋白信号中分离。蛋白光谱（绿色曲线）和杂质光谱（蓝色曲线）各自独立，残差拟合（黄色线）反映解卷积质量。杂质在 A280 处的贡献为 1.05 OD。表中的浓度是混合后样品的读数。BSA 溶液和 DNA 溶液混合时被稀释，所以这个读数不能直接和 ~20 mg/mL 比较。
BSA + DNA 混合样品在 Protein (Lysates) 应用下的解卷积光谱。黑色为基线校正后 UV/Vis，绿色为蛋白，蓝色为杂质，黄色为残差拟合。
当 280 nm 吸光度被杂质干扰得太厉害、A280 直接没法用的时候，比色测定是测总蛋白浓度的经典备选。BCA、Bradford、Lowry、660 nm Protein Assay 都是常见选择。逻辑都一样：加试剂和蛋白反应产生有色化合物，比较样品和标准品的吸光度来定量。
Lunatic 内置了对应的 Standard Curve 应用，拟合标准曲线后自动算出未知样品浓度；下面的 BCA 实验选的是二次多项式拟合。Lunatic 板和标准透明底 96 孔板都能用。
实验：BCA 测定
Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific)，线性范围 0.02–2 mg/mL。
未知样品：BSA 稀释至 1.5、1、0.5 mg/mL。标准品：2、1.25、0.75、0.15 mg/mL。
试剂配制：Reagent B : Reagent A = 1:50；样品 : 工作液 = 1:20。37 °C 避光孵育 30 分钟。
2 µL × 8 次重复，High Lunatic plate，BCA Assay 应用。
BCA 反应中蛋白将 Cu2+ 还原，生成紫色络合物，在 562 nm 处有吸收峰。Lunatic 测量 562 nm 吸光度并扣除 440 nm 背景，再根据标准曲线算浓度。未知样品叠加在标准曲线上的位置和重复间 SD 见下图。
BCA Assay 应用生成的标准曲线上叠加未知样品。二次多项式拟合：y = −0.0279C² + 0.882C + 0.0848，R² = 0.9968。误差线为 8 次重复的 SD。
选应用先看样品。杂质少的纯化蛋白用 A280 + 浊度校正；IgG 浓度高到光谱饱和，用 IgG (High concentration) 外推。复杂裂解物用 Unmix 把蛋白从杂质中拆出来，A280 受干扰的样品走 BCA/Bradford/Lowry。
这四种方法都在同一台 Lunatic 上切换，High Lunatic plate 上 96 个样品约 10 分钟读完。对每天跑大量蛋白定量的实验室，省下的是逐个上样、稀释和清洗比色皿的时间，也少了这几步带来的操作误差。