Oligo 定量：17 nt 与 105 nt 摩尔浓度差 6.6 倍

Oligo 定量：17 nt 与 105 nt 摩尔浓度差 6.6 倍

Lunatic 内置三种 A260 Oligo 应用：Oligo DNA Sequence、Oligo RNA Sequence 和 Oligo Molar E，用 2 µL 样品的 260 nm 吸光度定量 DNA 和 RNA 寡核苷酸（ng/µL 和 pmol/µL）。输入序列时，软件按序列算出 E、MW 和浓度因子；用 Oligo Molar E 时，E 由用户输入，MW 可选填。

通用换算因子为什么不够用

常规核酸定量套用通用换算因子，如 ssDNA 的 33 ng/µL·OD。合成寡核苷酸（Oligonucleotide）长度和碱基组成各不相同，摩尔消光系数和分子量都随序列变化，固定因子照顾不到。Oligo 应用则允许你输入序列或摩尔消光系数：Lunatic 按序列推算 E 和浓度因子，或直接用输入的 E 计算浓度。

适用场景：引物（Primer）定量、合成 Oligo QC、ASO（反义寡核苷酸）浓度确认、siRNA/sgRNA 的入库前检测等。

案例：序列不同，浓度因子不同

同一管样品输入不同的 Oligo 序列，质量浓度只在 305–328 ng/µL 之间，摩尔浓度却能差好几倍。原因是消光系数 E、分子量 MW 和浓度因子都由序列决定。

下表是一个实测案例：同一管样品稀释后上机，分别输入 5 条不同序列。每条序列的重复测量（_1 和 _2）A260 读数只有微小波动，不同序列之间的 E、MW 和浓度因子却差异明显。

输入的 5 条 Oligo 序列

Oligo 1:TTGTGGGTGATGTAATCGGTA

Oligo 2:GCCAGGCTTCTAAAATTAGATGTAGAAAATATAAATAGACTGCTTTAGGTAATGAGCCACCAGTG

Oligo 3:GTAAAACGACGGCCAGTGTGGAGCTGAAACATGCAAT

Oligo 4:ATCAAATGAAACAATGTATTCCACCTTTTACAGTTATAAGCAAGTGGAATGTATCGAATGAAATATTGTGTTCCACCTTTTACAGTTATAAAGCAAGTGGAATGT

Oligo 5:TAGACGGGGCTGACCGC

Oligo 测量结果（同一样品稀释后重复测量）

样品 / E / MW / 浓度因子 / A260 / ng/µL / pmol/µL

Oligo 1_1:E 210300;MW 6547.3;浓度因子 31.133;A260 10.02;ng/µL 311.8;pmol/µL 47.6

Oligo 1_2:E 210300;MW 6547.3;浓度因子 31.133;A260 10.17;ng/µL 316.6;pmol/µL 48.4

Oligo 2_1:E 660500;MW 20127.1;浓度因子 30.473;A260 10.06;ng/µL 306.6;pmol/µL 15.2

Oligo 2_2:E 660500;MW 20127.1;浓度因子 30.473;A260 10.16;ng/µL 309.6;pmol/µL 15.4

Oligo 3_1:E 373500;MW 11480.5;浓度因子 30.738;A260 10;ng/µL 307.5;pmol/µL 26.8

Oligo 3_2:E 373500;MW 11480.5;浓度因子 30.738;A260 10.01;ng/µL 307.6;pmol/µL 26.8

Oligo 4_1:E 1045700;MW 32132.9;浓度因子 30.729;A260 9.95;ng/µL 305.7;pmol/µL 9.5

Oligo 4_2:E 1045700;MW 32132.9;浓度因子 30.729;A260 10.07;ng/µL 309.6;pmol/µL 9.6

Oligo 5_1:E 161000;MW 5236.4;浓度因子 32.524;A260 10.09;ng/µL 328.3;pmol/µL 62.7

Oligo 5_2:E 161000;MW 5236.4;浓度因子 32.524;A260 10;ng/µL 325.4;pmol/µL 62.1

> E：L/(mol·cm)；MW：g/mol；浓度因子：ng/µL。同一序列的 _1 和 _2 为重复测量。

对比两端的数据：Oligo 5 是 17 nt 短链，报告 328.3 ng/µL、62.7 pmol/µL；Oligo 4 为 105 nt，报告 305.7 ng/µL、9.5 pmol/µL。两者 A260 几乎相同，但分子量差 6 倍，摩尔浓度差 6.6 倍。做 PCR 或 ASO 实验时，如果只看质量浓度、不按各自的 MW 换算摩尔数，引物投料量可能偏离目标值好几倍。

上机流程：选应用、读结果、导报告

建实验时选定应用

在 Lunatic Client 软件中，点击"Nucleic Acids"样品类型按钮，在"Classic A260"列下方能找到这几个 Oligo 应用。应用要在建实验时选定。

Lunatic Client 界面。后方为 Sample Type 选择界面，前方展开了 Classic A260 列下的全部应用，Oligo 相关应用在列表底部。

Blank 设置：背景扣除的准确性直接取决于 Blank。使用 Oligo 应用时，务必将样品的溶解缓冲液设为 Blank。

两种输入方式（DNA 与 RNA Sequence 同属序列输入）

应用 / 用户输入 / 适用场景

Oligo Molar E:用户输入 摩尔消光系数 E（L/(mol·cm)，默认=1）；可选输入分子量 MW（g/mol）;适用场景 已知消光系数，不需要输入序列

Oligo Sequence 系列:用户输入 Oligo 序列（支持 IUPAC 简并碱基代码）;适用场景 有序列信息，软件自动计算 E、MW 和浓度因子

在 Results 界面读结果

测量完成后，Results 界面会显示经背景扣除的 UV/Vis 光谱（黑色曲线），以及按消光系数或浓度因子算出的 Oligo 浓度。

Results 界面（Oligo Molar E 应用）。光谱右侧显示 A260 浓度、消光系数 E、分子量 MW 和背景值。

报告的关键数值

把序列相关数值放进报告

在 Report Settings 标签页中，左侧列出所有可用的数据列，右侧是当前报告包含的列，拖拽即可调整。做 Oligo 定量时，可以把 E、MW 等由序列决定的数值一起放进报告，导出为 XLSX、CSV、PDF、XML、HTML 或 TXT 六种格式之一。

Report Settings 界面。左侧为可用列名，右侧为报告将包含的列。底部预览当前报告内容，右侧可点击 Save Report 保存。

除了屏幕上直接显示的浓度和光谱数据，报告中还可以加入经典光谱学参数：A230、A280、A260/A230、A260/A280（这些值均为背景扣除后的结果）。