在含 400 mM NaCl 的 DNA 样品里，Qubit 和 PicoGreen 都明显低估了浓度，Lunatic 的读数依然接近理论值。荧光信号会被盐干扰，UV/Vis 测的是 DNA 自身的吸收。Lunatic 用 2 µL 样品直接做 UV/Vis 全光谱扫描，浓度和纯度一次出，还能用 Unmix 算法把 RNA、蛋白质等杂质的吸收贡献拆开。
PicoGreen 的典型流程是这样的：先把 DNA 标准品做系列稀释，再把染料稀释成工作液，然后把样品也稀释到线性范围内，混合后读荧光、拟标准曲线、算浓度。稀释步骤越多，误差来源也越多。
更麻烦的是，荧光信号会被样品中的盐、去垢剂等杂质干扰。100 mM NaCl 就足以影响 PicoGreen 与 DNA 的结合，导致荧光信号下降、浓度被低估。而且荧光法不报告 A260/A280 和 A260/A230 这类纯度指标，也就无法判断样品里有没有蛋白或有机物残留。
Lunatic 直接测 DNA 自身的 UV/Vis 吸收。DNA 在 260 nm 有特征吸收，吸光度乘以浓度因子就是浓度，所以不需要染料和标准曲线；0.03–275 OD 的动态范围又让样品不需要稀释。2 µL 加到板上，5 分钟 96 个样品全部出结果，浓度和纯度同时报告。样品由毛细力吸进密闭的储液腔，最多 2 小时内不蒸发。
需要合规记录时，可以选配 21 CFR Part 11 合规包。
Lunatic（A）使用 SBS 兼容板格式，5 分钟内测量最多 96 个样品。Little Lunatic（B）使用芯片格式，用 Lunatic Chip 时约 2 分钟测完最多 16 个样品。
对纯化后、杂质很少的 DNA 样品，经典的 A260 应用就够了。Lunatic 在整个光谱上做瑞利散射校正（turbidity correction），比传统的单波长背景扣除更准。校正后取 260 nm 的吸光度，乘以浓度因子 50，就得到 dsDNA 浓度：
c = OD260 × 50
OD260 是软件折算到 10 mm 光程后的值。
同时报告 A260/A280 和 A260/A230 比值。A260/A280 在 1.8 左右表示 DNA 纯净，A260/A230 大于 2 表示无有机物污染。
纯 dsDNA（小牛胸腺 DNA，TE 缓冲液）
105.2 ± 0.64ng/µL0.05Background (A260)1.87A260/A2802.44A260/A230
小牛胸腺 DNA 在 TE 缓冲液中的代表性吸收光谱。插入表格显示 3 次重复的平均浓度 ± SD、260 nm 背景、A260/A280 和 A260/A230 比值。
纯化后的样品有时会残留磁珠或其他颗粒，造成背景散射。下面对比了同一个掺了 500 nm NIST 聚苯乙烯标准珠的 DNA 样品，分别用 A260 dsDNA（浊度校正）和 dsDNA A260 -bg(340)（单点校正）两种应用测量。
A260 dsDNA（浊度校正）
浓度93.0 ± 0.15 ng/µLBackground0.80A260/A2801.81A260/A2306.65
dsDNA A260 -bg(340)（单点校正）
浓度108.4 ± 0.25 ng/µLBackground0.48A260/A2801.76A260/A2302.77
单点校正（340 nm）报告的浓度更高：它扣掉的背景是 0.48，浊度校正扣掉的是 0.80。少扣的那部分散射被算进了 DNA 吸收。两种应用的 A260/A280 都在 1.8 左右，A260/A230 都大于 2，纯度指标正常。
含 1000 倍稀释 500 nm NIST 标准聚苯乙烯珠子的小牛胸腺 DNA，分别用 A260 dsDNA 应用（A）和 dsDNA A260 -bg(340) 应用（B）测量。
DNA 提取产物里经常混着 RNA、蛋白质、缓冲液组分甚至细胞碎片。每种杂质都有自己的吸收特征，会干扰 A260 读数。单看 A260/A280 比值只能粗略判断有没有蛋白污染，看不出具体有多少。
Unmix 应用用专有的解卷积算法分析完整光谱，把 DNA 的吸收贡献从杂质中分离出来，单独定量。常用的有两个应用：
DNA Mamm.
专门针对从组织/血液提取的哺乳动物 DNA。能识别并分离 RNA 杂质的贡献，同时处理苯酚、硫氰酸盐等常见提取试剂残留。
Nucleic Acids (DNA equiv.)
适用于任何来源的 DNA。在蛋白质存在的情况下定量总核酸浓度（以 DNA 当量报告），同时报告 260 nm 和 280 nm 处杂质的吸光度贡献。
两种应用都能处理苯酚-氯仿、DNAzol、TRIzol 提取后常见的缓冲液残留。
小牛胸腺 DNA（~100 ng/µL）+ 小牛肝脏 RNA（~50 ng/µL），TE 缓冲液，用 DNA Mamm. 应用测量，4 次重复。
108.4 ± 8.3DNA (ng/µL)
45.8 ± 6.2RNA (ng/µL)
Unmix 成功把 RNA 识别为杂质并单独报告了它的浓度。DNA 浓度（绿色曲线）和 RNA 浓度（蓝色曲线）各自分离，残差（黄色线）表示拟合质量。
DNA Mamm. 应用对 DNA + RNA 混合样品的解卷积光谱。DNA（绿色）和 RNA 杂质（蓝色）分离，插入表格为 4 次重复的平均浓度 ± SD。
小牛胸腺 DNA（~100 ng/µL）+ 0.1% BSA，TE 缓冲液，用 Nucleic Acids (DNA equiv.) 应用测量，4 次重复。
111.0 ± 1.6DNA equiv. (ng/µL)
0.35Impurities (A260)
0.66Protein (A280)
核酸光谱（紫色曲线）与蛋白杂质光谱（蓝色曲线）分离，280 nm 处的蛋白贡献被单独报告。DNA 当量为 111.0 ± 1.6 ng/µL，投料约 100 ng/µL。
Nucleic Acids (DNA equiv.) 应用对 DNA + 0.1% BSA 混合样品的解卷积光谱。核酸（紫色）与蛋白杂质（蓝色）分离，插入表格为 4 次重复的平均浓度 ± SD。
Qubit 和 PicoGreen 都是荧光核酸定量的主流选择，灵敏度高、对 dsDNA 特异性强。但它们有个共同的短板：荧光信号会被样品基质干扰，而且不报告纯度信息。如果样品含有低浓度核酸，还需要更大的样品量才能落在线性范围内。
实验设计
小牛胸腺 DNA 稀释至 ~100 ng/µL（TE 缓冲液，pH 8.0），分别加入以下杂质之一：
无杂质
纯 DNA 对照50 ng/µL RNA
小牛肝脏 RNA400 mM NaCl
高盐干扰2.75 mM EDTA
螯合剂残留
每组 4 次重复。Lunatic 用 DNA Mamm. 应用（High Lunatic plate，水做空白）；Qubit 用 dsDNA BR Assay Kit（2 µL 样品）；PicoGreen 用 Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit（1 µL 样品）。
含不同杂质的 dsDNA 样品（理论浓度 100 ng/µL，红线）用 Lunatic UV/Vis、Qubit 和 PicoGreen 分别定量。柱高为 4 次重复平均值，误差线为 SD。
关键发现
在无杂质和含 RNA 的样品中，三种方法都接近 100 ng/µL 的理论值。
但含 NaCl 的样品中，Qubit 和 PicoGreen 明显低估了 DNA 浓度。从图上读，Qubit 约 85 ng/µL，PicoGreen 约 78 ng/µL，Lunatic 约 106 ng/µL，仍接近理论值。
含 EDTA 的样品中，三种方法表现相当。
NaCl 是生物样品中最常见的盐之一。所以样品含盐达到 100 mM 以上时，荧光法的读数就可能偏低。
荧光法和 UV/Vis 法的取舍取决于样品。荧光法在灵敏度上仍然有优势，适合极低浓度样品。批量定量纯化后的 DNA、同时需要纯度信息时，UV/Vis 全光谱省掉了染料、标准曲线和额外稀释，含盐样品的读数也不会被拉低。
样品不纯时，选 DNA Mamm. 或 Nucleic Acids (DNA equiv.) 应用，把 DNA 的贡献单独拆出来。