单波长定量的前提是样品足够纯：A280 只有蛋白在吸收。但裂解液、血浆、组织提取物这类复杂基质里，核酸、血红蛋白、散射颗粒都在贡献 OD 值。Unmix 用全光谱拟合把这些组分一个个拆开，分别报浓度。结果界面用五种颜色标注这些组分。
传统 A280 蛋白定量的隐含假设是：280 nm 处的吸光度全部来自蛋白。但如果样品里还有下面这些成分，A280 读数就偏高，浓度算出来也偏高：
Unmix 换了一种思路。软件内置了蛋白、DNA、RNA、各种缓冲液等常见组分的标准吸收光谱。拿到你的实测光谱后，它在 230–750 nm 全波段上做拟合。拟合要找出这些标准光谱以什么比例叠加起来最接近实测值。拆完之后，软件分别报告每种组分贡献的 OD 和对应的浓度。
Unmix Overview。和 Classic 不同，Unmix 的缩略图显示的是反卷积后的拆分光谱（而非单条吸收曲线）。右上角可以在 Absorbance 和 Concentration 视图之间切换。
打开 Unmix 的 Details 界面，光谱图和 Classic 有明显不同：不再是一条黑线，而是一组彩色填充曲线叠在一起。黑色线是扣除背景后的实测光谱，不算组分；彩色部分是 Unmix 拆出来的各组分。常规 Unmix 应用里每种颜色代表一类东西：
### 绿色 — 目标分子
目标分子：选了 DNA (Tissue/Blood) 应用，绿色就是 DNA 的光谱贡献；选了 Protein (Lysates)，绿色就是蛋白。绿色曲线下方的面积对应目标分子的浓度。
### 蓝色 — 杂质 / 干扰物
在紫外-可见光范围内有吸收的其他分子。如果你测的是蛋白，蓝色可能代表核酸；如果测的是 DNA，蓝色可能代表蛋白。蓝色面积越大，说明样品中的杂质含量越高。
### 灰色 — 背景散射
会引起光散射的物质，比如样品中的微珠（beads）、脂质颗粒、或者聚集体。散射不属于真正的吸收，但会抬高整条基线。Unmix 把它单独拆出来，让目标分子的浓度更准。
### 黄色 — 残差（Residue）
模型拟合后剩下的、无法归入任何已知组分的那部分光谱。黄色曲线就是残差；由残差算出的相对均方根误差即 RRSE（Relative Root-mean-Square Error），是拟合质量的核心指标。详见下一节。
### 紫色 — 总核酸（合并显示）
只在核酸 Unmix 应用中出现。总核酸浓度低于 25 ng/µL 或拟合质量较差（残差过高）时，Unmix 算法无法可靠地区分 DNA 和 RNA。于是算法把两者合并为"总核酸"用紫色显示，不再分别报告。
RRSE（Relative Root-mean-Square Error）衡量的是实测光谱和拟合结果之间还差多少。数字越小，拟合越好，浓度越可信。
RRSE 在界面上有两种呈现：
Overview 界面底部还有一行 Quality of fit (RRSE) 色块，扫一眼颜色就知道哪些样品的拟合有问题。
软件会在该样品旁边显示警告标记。高残差意味着实测光谱里有一部分是模型没法解释的。查一下是不是这几种情况：
血浆里蛋白浓度通常在 60–80 mg/mL，A280 处的吸收峰非常强。而临床关注的溶血指标远弱于蛋白，在常规 230–750 nm 光谱图上基本看不出来。这些指标是血红蛋白在 410 nm 的 Soret band，以及胆红素在 450 nm 附近的吸收。
Plasma QC 专门针对这个问题做了优化。结果界面的光谱只显示 350–650 nm，故意避开蛋白在 280 nm 的强峰。这样血红蛋白和胆红素的特征就露出来了。
Plasma QC 报告四个指标，表中的红、橙两色只在这个视图里出现：
组分 / 颜色 / 关键波长 / 单位
Hemoglobin（血红蛋白）:颜色 红色;关键波长 A410;单位 mg/dL
Bilirubin（胆红素）:颜色 橙色;关键波长 A450;单位 mg/dL
Protein（总蛋白）:颜色 绿色;关键波长 A280;单位 mg/mL
Turbidity（浊度）:颜色 灰色;关键波长 —;单位 OD660
具体的换算方式：血红蛋白浓度 = A410 峰值 × 浓度因子 13.23；胆红素浓度 = A450 峰值 × 浓度因子 1.24875；蛋白浓度用 A280 和默认 E1% = 10（血浆这种复杂蛋白混合物的通用近似值）计算。浊度则从背景散射光谱中提取，以 OD660 形式报告，这是临床上常用的脂血指标。
Plasma QC 详细视图。光谱范围限定在 350–650 nm，把血红蛋白（红色，A410）、胆红素（橙色，A450）和背景散射（灰色）拆分开来。左下方是 Quality of fit (RRSE) 色块。
这条规则在软件操作篇里出现过，原因在于两种模式扣除缓冲液信号的方式不同。
Classic 模式下用缓冲液做 blank。缓冲液本身在紫外区有一些吸收。先测一次扣掉，这样 OD 值就只反映溶质了。
Unmix 的逻辑不同。它的光谱模型库里已经收录了常见缓冲液的光谱特征。反卷积过程中，缓冲液的贡献会被当作一个"已知组分"拆出来，跟拆蛋白、拆核酸一样。如果你又在 blank 里放了缓冲液，缓冲液的光谱就被扣了两遍：一次被 blanking 扣掉，一次被反卷积拆走。
这个"双重扣除"叫 overblanking。后果是引入误差、残差升高，结果不可靠。所以 Unmix 的 blank 只能用水：水在紫外区几乎没有吸收，所以可以当零基线。
Classic UV/Vis:Unmix
定量原理 / 单波长 OD 值 + Beer-Lambert 定律 / 全光谱拟合 + 光谱反卷积
适合的样品:单波长 OD 值 + Beer-Lambert 定律 纯化蛋白、纯化核酸等成分单一的样品;全光谱拟合 + 光谱反卷积 裂解液、血浆、组织提取物等复杂基质样品
杂质处理:单波长 OD 值 + Beer-Lambert 定律 无法区分：杂质的吸收混在一起计入浓度;全光谱拟合 + 光谱反卷积 拆开：单独报告每种组分的浓度和占比
Blank:单波长 OD 值 + Beer-Lambert 定律 用缓冲液;全光谱拟合 + 光谱反卷积 必须用水
板类型限制:单波长 OD 值 + Beer-Lambert 定律 Lunatic Plate / High Lunatic Plate / 标准 96 孔板;全光谱拟合 + 光谱反卷积 只支持 Lunatic Plate / High Lunatic Plate
判断标准看样品纯不纯。column 走完的纯化蛋白、试剂盒提的纯 DNA，用 Classic 足够了，结果也更好理解。裂解液、血浆、crude extract 这类多组分混合的样品，走 Unmix 能看到各组分各占多少。Classic 给出的则是混入了杂质贡献的浓度。
两种算法也可以事后切换。测完之后原始光谱已经存下来了，在 Analysis 里随时可以用 Select Application 切换 Classic 和 Unmix，用不同的算法重算。前提是板上测过对应的 blank 孔：切到 Unmix 要把水孔标成 blank，切回 Classic 要改回缓冲液孔；板上没有就要重新测量。