用 Uncle 测定 Tm、Tagg 和 DLS 粒径，用 Honeybun 测定粘度。对象是 mAb1、mAb2、adalimumab 和 trastuzumab，各配成 4 种辅料配方和 1、10、100 mg/mL 三个浓度（trastuzumab 只做到 10 mg/mL），从中找出各自的最佳辅料组合。
可开发性评估和配方筛选能在早期发现问题，前提是工具跟得上。DSC、SEC 和传统粘度计都成熟，但要花大量时间和样品，还要专人操作。筛选需要的是高通量、微量、结果明确的方案；最好同一种分析技术能贯穿从发现到生产的全过程。
Uncle 集成全光谱荧光、SLS 和 DLS，9 µL 样品即可表征蛋白和基因治疗载体。它在 15–95 °C 范围内温控，样品架密封，一次实验就能拿到荧光、聚集、粒径、多分散性和热去折叠数据，最多 48 个样品同时运行。
稳定性之外还要看粘度。在发现和早期开发中，高粘度表明蛋白分子之间或与辅料之间存在相互作用；到了后期，粘度和稳定性直接影响可生产性、安全性和给药方式。尽早选对配方能从源头控制这些问题，前提是粘度也能像稳定性一样快速、微量地测。Honeybun 每个样品用 35 µL（默认）或 15 µL（低体积模式），一次最多并行测 10 个样品：低粘度样品不到一分钟，高粘度样品也不超过 10 分钟。它的动态范围为 0.5–150 cP，覆盖多数高浓度生物药。
Figure 1A. Uncle 稳定性平台
Figure 1B. Honeybun 微量粘度计
mAb1、mAb2 和 adalimumab（储液 26 mg/mL）稀释至 10 mg/mL，14,000 × g 离心后通过 0.1 µm 注射器过滤。各取 400 µL 加入 10 kDa MWCO 再生纤维素 Unfilter 96 板，用 Big Tuna 在三次重复中置换缓冲液至 10 mM histidine，pH 6，含 0.001% PS80。缓冲液中分别加入 0.9% NaCl、80 mg/mL 蔗糖、10 mg/mL 精氨酸、或 80 mg/mL 蔗糖 + 10 mg/mL 精氨酸，随后将样品浓缩至 100 mg/mL。Trastuzumab（200 µL，8.5 mg/mL）在单孔中置换至相同配方后浓缩至 10 mg/mL。所有缓冲液置换和浓缩使用 Big Tuna 默认参数（0.5–50 mg/mL）。初始和最终浓度、粒径及 PDI 在 Stunner 上四次重复测定。
蛋白稀释至 1、10 或 100 mg/mL，各取 9 µL 加入 Uni（16 × 9 µL 石英比色皿阵列，硅胶垫密封），三次重复。在 Uncle 上以"Tm & Tagg with DLS"应用从 15–95 °C 以 0.3 °C/min 升温，激发波长 266 和 473 nm，记录荧光和 SLS。Tm 由 300–430 nm 荧光强度曲线的 BCM 确定，Tagg 由 266 nm SLS 强度确定，均为三次重复平均值。DLS 在热升温前后各测一次（4 × 5 s 采集）。粘度在 Honeybun 上以默认模式测定：100 mg/mL，35 µL，20 °C，三次重复。
在 mAb1 的 10 mM histidine pH 6 配方中，加入蔗糖或精氨酸都提高了构象稳定性：Tm 从 NaCl 条件下的 67 °C 升至约 70 °C（Figure 2）。蔗糖和精氨酸一起加并不叠加，Tm 与单独加任一种相近。
Tagg 却没有跟着 Tm 走。蔗糖虽然提高了 Tm，Tagg 却和 NaCl 一样，都约 72.1 °C；精氨酸单独使用时 Tagg 最高（76 °C）。但 NaCl 和精氨酸的总 SLS 信号远高于蔗糖。SLS 与颗粒尺寸和数量成正比，所以蔗糖条件下聚集可能起始稍早，精氨酸和 NaCl 条件下聚集却更多。
这一 Tagg 排序只对应 Figure 2 的条件。到 100 mg/mL，mAb1 的 Tagg 以蔗糖最高，精氨酸反而低于蔗糖（Table 1）。
Figure 2. mAb1 在 10 mM histidine pH 6 + 0.001% PS80 中，含 NaCl（绿色）、蔗糖（蓝色）、精氨酸（黄色）或蔗糖 + 精氨酸（灰色）。BCM（虚线，左 y 轴）和 SLS（实线，右 y 轴），三次重复平均值。
为了确认 SLS 的结论，再用 DLS 比较加热前后的粒径分布；它还能给出聚集体的尺寸和多分散性。mAb1 在蔗糖条件下，15 °C 和 95 °C 均为单峰分布，平均流体动力学直径分别为 8 nm 和 17 nm（Figure 3A）。15 °C 的 DLS 峰比 95 °C 更窄。
加入蔗糖 + 精氨酸后，mAb1 在 15 °C 仍为单分散（平均 11 nm）。但 95 °C 时粒径分布明显扩展，流体动力学尺寸跨越 100 nm 以下至 1,000 nm 以上的宽范围（Figure 3B）。NaCl 或精氨酸单独使用时的 DLS 行为与此类似（数据未展示）。综合 SLS 和 DLS，与单用蔗糖相比，mAb1 在 NaCl 或精氨酸条件下受热更容易形成大聚集体。
Figure 3A. mAb1 + 蔗糖在 15 °C（浅色）和 95 °C（深色）的 DLS 强度分布
Figure 3B. mAb1 + 蔗糖 + 精氨酸在 15 °C 和 95 °C 的 DLS 强度分布
mAb1 和 trastuzumab 在多种配方和浓度下的 Tm 和 Tagg 接近（Figure 4）。Adalimumab 的 Tm 与这两者相近，Tagg 却通常较低，可见 Tm 相近不代表聚集行为也相近。mAb2 的 Tm 和 Tagg 整体最低，稳定性最差。
浓度同样会改变辅料的效果。在 1 和 10 mg/mL 下，蔗糖对 mAb1 和 trastuzumab 的稳定作用最大，NaCl 则使 mAb1、trastuzumab 和 mAb2 去稳定化。1 mg/mL 时 NaCl 同时影响 Tm 和 Tagg；到 10 mg/mL，它对 mAb1 和 trastuzumab 主要影响 Tm，对 mAb2 主要影响 Tagg。
浓度升高也不一定更不稳定。mAb2 在 10 mg/mL 时的构象和胶体稳定性反而优于 1 mg/mL，adalimumab 在 10 mg/mL 时的 Tagg 也升高。但这种稳定化到 100 mg/mL 就不再出现（Table 1）。
Figure 4. mAb1（绿色）、mAb2（蓝色）、adalimumab（黄色）和 trastuzumab（紫色）在 1 mg/mL (A) 和 10 mg/mL (B) 的 Tm vs Tagg。含 NaCl（方形）、蔗糖（圆形）、精氨酸（三角）或蔗糖 + 精氨酸（菱形）。误差棒为三次重复 ± 1 SD。
Protein / + NaCl / + sucrose / + arginine / + suc + arg
mAb1:+ NaCl 65.7;+ sucrose 73.7;+ arginine 69.3;+ suc + arg 71.3
mAb2:+ NaCl 64.6;+ sucrose 66.1;+ arginine 68.3;+ suc + arg 68.9
adalimumab:+ NaCl 65.7;+ sucrose n.d.;+ arginine 66.4;+ suc + arg 68.3
Table 1. 100 mg/mL 下 Tagg（°C）。绿色为各抗体最佳辅料。Adalimumab + 蔗糖在室温下已聚集（n.d.）。
高浓度皮下给药制剂的变性（denaturation）风险相对较低，但它们在更低的温度就开始聚集（Tagg 更低），选对辅料能明显降低这一风险。100 mg/mL 下，蔗糖把 mAb1 的 Tagg 从 NaCl 的 65.7 °C 提到 73.7 °C。对 mAb2 和 adalimumab，蔗糖 + 精氨酸组合推迟热诱导聚集的效果最大。
稳定性过关后，高浓度 mAb 制剂还要过粘度这一关，它影响给药、可开发性和可生产性。许多蛋白的粘度随浓度增加呈"曲棍球杆"式上升，指数增长开始的浓度因蛋白而异，但合适的配方能把粘度降下来。传统粘度计慢、耗样量大、操作复杂，所以粘度很少进入早期高通量筛选。
100 mg/mL mAb 在含蔗糖配方中的粘度通常高于仅含盐的配方（Figure 5）。精氨酸能减弱蛋白分子间的疏水相互作用，是常用的降粘辅料。但如果高粘度主要不是疏水相互作用造成的，精氨酸反而可能提高粘度。mAb2 和 mAb1 的结果正好相反：蔗糖 + 精氨酸让 mAb2 的粘度比单用蔗糖时低，mAb1 的粘度反而升高。
Figure 5. 100 mg/mL mAb1、mAb2 和 adalimumab 的粘度。含 NaCl（绿色）、蔗糖（蓝色）、精氨酸（黄色）或蔗糖 + 精氨酸（灰色）。误差棒为三次重复 ± 1 SD。
Antibody / 1 mg/mL / 10 mg/mL / 100 mg/mL / Overall
mAb1:1 mg/mL + sucrose;10 mg/mL + sucrose;100 mg/mL + sucrose;Overall + sucrose
mAb2:1 mg/mL + suc + arg;10 mg/mL + arginine;100 mg/mL + suc + arg;Overall + suc + arg
adalimumab:1 mg/mL + NaCl;10 mg/mL + suc + arg;100 mg/mL + suc + arg;Overall + suc + arg
trastuzumab:1 mg/mL + sucrose;10 mg/mL + sucrose;100 mg/mL n.d.;Overall + sucrose
Table 2. 各抗体在 1、10、100 mg/mL 下的最佳辅料（综合 Tm、Tagg、DLS 和粘度结果）。蔗糖是 mAb1 和 trastuzumab 的最佳选择；蔗糖 + 精氨酸组合最适合 mAb2 和 adalimumab。
四个抗体没有通用的最佳辅料：蔗糖适合 mAb1 和 trastuzumab，蔗糖 + 精氨酸适合 mAb2 和 adalimumab（Table 2）。最佳辅料还会随浓度变：adalimumab 在 1 mg/mL 时以 NaCl 最好，mAb2 在 10 mg/mL 时以单用精氨酸最好。
所以针对皮下给药优化配方时，应在接近实际给药的蛋白浓度下测试。把 Uncle 的稳定性数据与 Honeybun 的粘度数据放在一起，就能在给药浓度下同时比较各配方和候选物的稳定性与粘度。