Aunty 在一次实验中同时采集 DSF（差示扫描荧光法）、DLS（动态光散射）和 SLS（静态光散射）数据。由此测出蛋白的熔解温度、聚集温度、粒径和分子间相互作用，覆盖构象、胶体和等温稳定性。参数一多，读结果时最容易弄混的是定义和正负号：同样是正值，B22 表示排斥，G22 却表示吸引。
应用类型 / 适用场景 / 输出参数
Tm & Tagg:适用场景 按熔解和聚集温度筛选和排序生物制剂（抗体全长或片段如 Fab、scFv），用于蛋白工程、下游筛选、预配方和工艺开发;输出参数 Tm、Tonset、Tagg
Tm & Tagg with reporter dye:适用场景 同上，但使用 470 nm 激发的外源染料。适用于缺乏内源荧光或配方猝灭荧光的蛋白;输出参数 Tm、Tonset、Tagg
Tm & Tagg including size:适用场景 同上，但在升温全程加入 DLS 测量，实时监测流体动力学直径变化;输出参数 Tm、Tonset、Tagg、Tsize
Sizing only:适用场景 仅基于升温过程中流体动力学直径的变化来筛选和排序样品;输出参数 Tsize
Tm（melting temperature，熔解温度）50% 蛋白发生去折叠时的温度。按 Tm 排序是筛选最稳定候选物的经典方法。Tonset（melting onset temperature，熔解起始温度）去折叠开始发生的温度。Tonset 接近 Tm 的蛋白倾向于协同去折叠。Tagg（onset of aggregation temperature，聚集起始温度）聚集开始发生的温度。Tsize（onset of size increase temperature，粒径增大起始温度）蛋白流体动力学尺寸开始增大的温度。
应用类型 / 适用场景 / 输出参数
Sizing & Polydispersity:适用场景 通过 DLS 测定溶液中蛋白的流体动力学尺寸和粒径分布，用于筛选配方、评估储存稳定性、检测微量聚集体;输出参数 Z-average diameter、Z-avg. diffusion coefficient、PDI、Derived intensity、Peak parameters
Z-average diameter（Z-均直径）强度加权的谐波平均流体动力学直径。重复性好，适合质控和监测聚集过程中的平均粒径变化。由于是强度加权，对大颗粒极其敏感：少量聚集体就会使 Z-average 大幅升高。Z-average diffusion coefficient（Z-均扩散系数）DLS 直接测量的值，反映颗粒因布朗运动而扩散的速度，与粒径成反比。经 Stokes-Einstein 方程换算后得到 Z-average diameter。也是计算扩散相互作用参数（kD）以评估胶体稳定性的关键输入。PDI（polydispersity index，多分散系数）
衡量粒径分布宽窄的无量纲数值：< 0.1 为高度单分散（颗粒尺寸均一），> 0.2 表示分布很宽或存在聚集体。PDI 高且 Z-average 大时，通常意味着发生了聚集。
Derived intensity（衍生光强）
经激光功率和衰减器校正后的平均散射光强度（counts per second）。受颗粒尺寸和浓度影响，变化可指示聚集（增加）或降解（减少）。也是 SLS 计算分子量和 B22 的关键输入。
Peak parameters（峰参数）
通过正则化算法（DynaLS、CONTIN 或非负最小二乘法 NNLS）将多分散样品解析为不同的亚群（"峰"）。峰参数用于描述多模态分布（如单体和寡聚体混合物）。包括：
应用类型 / 适用场景 / 输出参数
Colloidal stability:适用场景 在蛋白溶液和生物制药开发中，用 B22、kD 和 G22 预测蛋白的聚集倾向。这些参数量化溶液中蛋白分子（与溶剂）之间的非特异性相互作用;输出参数 B22、kD、G22
B22（second virial coefficient，第二维里系数）
热力学参数，通过 SLS 测量蛋白浓度系列中的自缔合程度，适用于稀溶液。
kD（diffusion interaction parameter，扩散相互作用参数）
动力学参数，通过 DLS 测量浓度系列中扩散系数的浓度依赖性变化。
B22 和 kD 通常在同一次光散射实验中同时测得，均来自蛋白浓度系列的测量。G22（Kirkwood-Buff integral，Kirkwood-Buff 积分）
从与 B22 和 kD 相同的光散射数据计算，但采用更适合浓缩溶液的分析方法。B22 适用于稀溶液；在高浓度下（如皮下给药制剂），蛋白拥挤效应显著，G22 比 B22 更准确。
与 B22/kD 不同，G22 在稀释系列的每个浓度点各有一个离散值。
应用类型 / 适用场景 / 输出参数
Isothermal:适用场景 在恒定温度下评估候选物的生物物理特性，确定生物制品在储存条件下的货架期和有效性。采集荧光、SLS 和/或 DLS 数据，检测折叠、聚集或粒径变化等降解迹象;输出参数 k-values（荧光、SLS & DLS）
Isothermal with reporter dye:适用场景 同等温应用，但使用 470 nm 激发的外源染料;输出参数 k-values（荧光、SLS & DLS）
Out-of-the-box stability:适用场景 同等温实验，但样品可从仪器取出存放在外部培养箱中，定期放入 Aunty 读数。软件自动将结果拼接为连续文件;输出参数 k-values（荧光、SLS & DLS）
Out-of-the-box with reporter dye:适用场景 同离机实验，但使用 470 nm 激发的外源染料;输出参数 k-values（荧光、SLS & DLS）
等温（或离机）实验的数据按平均寿命指数衰减模型分析：软件执行单相、双相和三相拟合，将 k 值确定为衰减速率（衰减常数 τ 的倒数）。
k 值越小，变化越慢，样品越稳定。
DSF、DLS、SLS 各回答一个问题：DSF 看蛋白何时去折叠，DLS 看颗粒大小和分布，SLS 看聚集和自缔合。候选物初筛时，先按 Tm 和 Tagg 排序；要做高浓度制剂，再看 kD 和 B22，浓度很高时改看 G22。到了储存稳定性评估，用等温实验的 k 值比较配方。这些数据来自同一次实验，不用为每个参数另外准备样品。