IgG 在不同角度测到的 Z-average 几乎一样，LNP 却随角度明显变化。传统 DLS 在固定角度测一次散射就算粒径，对蛋白这类小颗粒够用，但碰到 LNP、病毒载体这类大颗粒就会因为角度效应而偏。Stunner 的 RADLS（旋转角度动态光散射）逐个角度采集，每个角度同时拿到 DLS 和 SLS 数据，再把各角度的 Z-average 粒径外推到 θ = 0°，得到角度无关的粒径。
Stunner：高速 UV/Vis + RADLS（旋转角度动态光散射），2 µL 同时测浓度和粒径。
光散射有两种基本模式，区别在于颗粒尺寸和光波长的比较。
Rayleigh 散射发生在颗粒远小于光波长时（通常小于 λ/10）。散射光强度与波长的四次方成反比（I ∝ λ⁻⁴），各个方向散射强度相同（各向同性）。蛋白质单体（几 nm）在 660 nm 激光下就是典型的 Rayleigh 散射体，探测器放在哪个角度，看到的信号都一样。
Rayleigh 散射（各向同性）：颗粒远小于波长时，各方向散射强度相等。
Mie 散射发生在颗粒不再远小于光波长时（超出上面 λ/10 的范围）。散射强度和方向的关系变得复杂：前向散射（角度小于 90°）通常比后向散射强得多。LNP、病毒载体、聚集体、大的胶体颗粒都属于 Mie 散射体。这意味着探测器放在不同角度会看到不同的信号强度，单一角度的测量结果可能有偏差。
颗粒够小时，测量角度不影响结果；颗粒变大后，角度就成了必须考虑的变量。RADLS 的多角度测量针对的正是大颗粒。
Mie 散射（各向异性）：颗粒不再远小于波长时，前向散射远强于后向散射，不同角度看到的强度不同。
用激光照射溶液中的颗粒，散射光的强度会随时间波动，因为颗粒在做布朗运动，不断改变位置。小颗粒运动快，散射光强度变化快（高频闪烁）；大颗粒运动慢，强度变化慢（低频闪烁）。DLS（也叫光子相关光谱，PCS）就是测这个「闪烁速度」来推算粒径。
小颗粒（上）散射光强度变化快，大颗粒（下）变化慢。DLS 通过分析这种波动速率来测粒径。
量化这个闪烁速度要用自相关函数。取某个时刻的散射强度，和几微秒后的强度做比较：间隔很短时两次几乎一样（高相关），间隔拉长后就不再相关（零相关）。把不同间隔的相关性画成图，就是自相关函数曲线。小颗粒的曲线衰减快，大颗粒衰减慢。
两种蛋白的自相关函数：绿色（小颗粒）衰减快，蓝色（大颗粒）衰减慢。衰减速率直接关联扩散系数。
从自相关函数拟合出扩散系数 D，再代入 Stokes-Einstein 方程就得到流体动力学直径 Dh。温度 T 越高、溶剂粘度 η 越低，颗粒扩散越快；颗粒越大，扩散越慢。
Stokes-Einstein 方程。K_B = 玻尔兹曼常数，T = 绝对温度，η = 溶剂粘度，D_h = 流体动力学直径。按直径计，D = K_BT/(3πηD_h)；按半径 R_h 计，分母为 6πηR_h。
自相关函数的分析有两种方法。累积量分析（Cumulants）把自相关函数拟合成单指数衰减，一阶项给出 Z-average 粒径，二阶项给出多分散性指数 PDI，这是最常用的"一个样品一个数"的方式。正则化分析（Regularization）则利用同一组 DLS 数据重建完整的粒径分布，能看出样品里有几个群体、各自多大。Stunner 同时用这两种方法，都符合 ISO 22412:2017 标准。
A. 均一样品的 DLS 粒径分布：单峰。B. 含有聚集体的异质样品：多峰，大粒径组分清晰可见。
DLS 对聚集体特别敏感
散射强度和粒径的六次方成正比（I ∝ R⁶）。一个 100 nm 的聚集体产生的散射信号是一个 10 nm 蛋白的 10⁶ 倍。这意味着哪怕聚集体只占样品的极小比例，DLS 也能捕捉到。跑细胞实验或做制剂稳定性研究之前快速扫一下 DLS，可以提前发现已经开始聚集的样品。
SLS 和 DLS 用的是同一束激光、同一个探测器，但看的东西不一样。DLS 看散射光强度随时间的波动（多快），SLS 看散射光的平均强度（多亮）。
DLS 分析散射光强度的时间波动（上方双箭头），SLS 取平均强度（下方水平线）。同一组原始数据，两种分析方式。
SLS 的平均散射强度受分子量、颗粒浓度、折射率增量（dn/dc）、回转半径 Rg、颗粒间相互作用力、激光波长和检测角度共同影响。反过来，已知样品的分子量和光学参数，就可以从 SLS 强度反推浓度或滴度。SLS 信号通常用 Rayleigh Ratio（归一化散射强度）表示。
对于 Rayleigh 散射体（蛋白、AAV 等），散射强度不随角度变化，单角度 SLS 就够了，可以直接算浓度或滴度。但对于 Mie 散射体（LNP、大的纳米颗粒），不同角度的 SLS 强度差别很大，需要多角度测量才能得到准确结果。
传统 DLS 设备在一个固定角度（通常 173° 或 90°）做测量。对蛋白这种 Rayleigh 散射体没问题，但对 LNP、聚集体这类 Mie 散射体，固定角度测到的 Z-average 粒径可能偏大或偏小，取决于角度和样品的具体光学特性。RADLS 的做法是从多个角度各测一次 DLS 和 SLS，然后把所有数据合在一起，外推出角度无关的粒径。
RADLS 光路：2 个激光器（各连一根发射光纤）+ 1 根旋转接收光纤连光子计数器。顶部激光测后向散射角 110–162°，底部激光测前向散射角 30–42°。
理论上，在 θ = 0° 测到的粒径才是角度无关的粒径。但 θ = 0° 意味着探测器直接看着激光，物理上做不到。RADLS 的策略是在多个角度（默认 7 个）各测一次 Z-average，然后数学外推到 θ = 0°。
对 IgG（Rayleigh 散射体）来说，不同角度测到的 Z-average 几乎一样，外推不外推差别不大。但对 LNP（Mie 散射体），不同角度的 Z-average 差别明显，外推到 θ = 0° 才能得到准确的粒径。
A. IgG：Z-average vs q² 基本平坦，Rayleigh 散射体，角度不影响结果。B. LNP：Z-average 随 q²（即角度）明显变化，Mie 散射体，需要多角度外推。
SLS 也有同样的逻辑。对于 Mie 散射体，不同角度的散射强度不一样，想从 SLS 准确算浓度或滴度，也需要外推到 θ = 0°。RADLS 在每个角度同时采集 DLS 和 SLS 数据，用一组测量解决两个问题。
DLS 给出的是流体动力学半径 Rh，基于扩散速度，等效于一个相同扩散速率的实心球的半径。SLS 通过 Guinier 图给出的是回转半径 Rg，质量分布相对于质心的均方根距离。
这两个半径的比值能揭示颗粒的内部结构。实心球（比如 BSA）的 Rg/Rh 接近 0.77，空心球（比如脂质体、病毒壳体，质量集中在外层）的 Rg/Rh 接近 1，棒状颗粒（比如纳米管）的 Rg/Rh 大于 1。同样 Rh = 50 nm 的两个颗粒，Rg/Rh 不同说明内部结构完全不同。Stunner 在 RADLS 模式下同时输出 Rg、Rh 和它们的比值。
LNP 的 Guinier 图：Rayleigh Ratio vs q²，斜率给出 R_g。结合 DLS 的 R_h，R_g/R_h 比值揭示颗粒是实心、空心还是棒状。
Stunner 用专有的微流控板承载样品。每块板含 96 个独立的微流控回路，材质是低紫外吸收的环烯烃共聚物（COC）。正常条件下，样品加入后 2 小时内稳定、无蒸发。每个回路有 5 个功能区：进样孔、储液通道、微比色皿、溢流池和通气孔。样品加到进样孔后，靠毛细作用自动引入储液通道。
含 16 个微流控回路的板条，安装在框架上组成 Stunner Plate。
每个回路内置两个固定光程的微比色皿：0.1 mm（UV/Vis，适合高浓度样品，OD 范围 20–275）和 0.7 mm（UV/Vis + RADLS，OD 范围 0.03–30）。0.7 mm 比色皿同时用于 UV/Vis 和光散射测量。板的外形尺寸和标准 96 孔板一样，可以直接上液体处理工作站。
微流控回路特写：进样孔 → 储液通道 → 0.1 mm 比色皿（UV/Vis）→ 0.7 mm 比色皿（UV/Vis + RADLS）→ 溢流池。
样品板放进 Stunner 后，每个样品自动完成 8 个步骤。UV/Vis 和 RADLS 在 7 个角度上的完整测量大约 1.5 分钟/样品。
# / 步骤 / 做什么
1:步骤 UV/Vis 空光束;做什么 测氙灯通过空气的光谱，作为每次实验的灯源基线。
2:步骤 UV/Vis 自动定位;做什么 移动板使光路穿过空比色皿中心，测 3 次微调位置，自动优化板的 XY 坐标。
3:步骤 空比色皿 UV/Vis;做什么 测空比色皿的透射光谱，扣除塑料对光谱的贡献。
4:步骤 样品泵入;做什么 泵连接通气孔，将样品从储液通道推入比色皿。实时监测透射光强度变化，检测到比色皿填满后自动停泵。
5:步骤 样品 UV/Vis;做什么 测含样品的比色皿透射光谱。步骤 3–5 对每个用户指定的比色皿重复，软件计算吸收光谱。
6:步骤 RADLS 高度扫描;做什么 RADLS 模块上下移动，找到 0.7 mm 比色皿的垂直中心（Z 坐标），避免顶部/底部/侧壁干扰。
7:步骤 激光对准扫描;做什么 每切换一个角度，发射光纤和接收光纤的交汇点会微移。自对准光学系统在优化高度上做 XY 扫描，找到光束重叠最大的位置。
8:步骤 多角度 DLS + SLS;做什么 在每个角度做 5 次采集 × 1 秒（默认），共 7 个角度（默认）。同时记录散射强度波动（→ DLS）和平均强度（→ SLS）。完成后移到下一个样品。
步骤 6–8 里有一个关键的工程细节：RADLS 模块旋转接收光纤到不同角度时，激光束和接收光纤的交汇点会发生微小偏移。如果不修正，信号强度会因为对准偏差而下降。Stunner 在每个角度都做一次自对准（步骤 7），保证实际测量时光束重叠在最佳位置。角度一致性靠硬件和软件双重保证，所以 Stunner 的多角度数据质量能用来做外推计算。
什么样品需要 RADLS
判据是颗粒尺寸和 λ/10 比。蛋白、AAV 在 λ/10 以下，单一角度的 DLS/SLS 够用；LNP、聚集体或其他大颗粒超出这个范围，要用 RADLS 把粒径和浓度外推到 θ = 0°。想区分颗粒是实心、空心还是棒状，也要用 RADLS 同时拿到 Rg 和 Rh。